La clonación molecular del ADN complementario para el factor de necrosis tumoral humano

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• La bioquímica es la bioquímica.
• Inmunología Inmunología.

Sus antecedentes:

• El factor de necrosis tumoral (TNF) es una proteína con toxicidad selectiva para las células tumorales.
• Comprender las propiedades del TNF es crucial para la investigación del cáncer.

Objetivo del estudio:

• Para purificar el TNF humano de las células de la leucemia.
• Para determinar su secuencia de aminoácidos y clonar el ADNc correspondiente.
• Para lograr una expresión de alto nivel de TNF en bacterias.

Principales métodos:

• Purificación de proteínas de las células de leucemia HL-60.
• Secuenciación de aminoácidos del extremo N.
• clonación de ADNc utilizando sondas de oligonucleótidos sintetizados.
• Análisis de la secuencia de nucleótidos.
• Expresión en E. coli utilizando el promotor lambda PL.

Principales resultados:

• El TNF humano se purificó como una proteína de 17.3-kDa con actividad citotóxica y citostática.
• Se determinó la secuencia de aminoácidos del N-terminal.
• Se clonó el cDNA TNF humano (1585 bp) que codifica 233 aminoácidos.
• El TNF maduro comienza en el residuo 77, con una secuencia líder de 76 aminoácidos.
• Se logró una expresión de alto nivel de TNF en E. coli.

Conclusiones:

• Purificación y caracterización exitosas del TNF humano.
• La clonación de ADN cNF humano proporciona una herramienta para futuras investigaciones.
• El sistema de ingeniería de E. coli permite la producción de TNF a gran escala.