Acoplamiento de aminas terciarias por oxidación para el etiquetado selectivo de las modificaciones post-traducionales...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología Química
• Proteomía

Sus antecedentes:

• La dimetilación de lisina (Kme2) es una modificación post-traduccional vital que regula las funciones celulares y las vías de la enfermedad.
• La identificación de las marcas Kme2 a nivel mundial es un desafío debido a la falta de tecnologías de etiquetado selectivo.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una nueva estrategia química para la modificación selectiva y la identificación global de la lisina dimetilada (Kme2).

Principales métodos:

• Se utilizó el acoplamiento terciario de aminas por oxidación (TACO) para convertir selectivamente Kme2 en aldehídos.
• Posteriormente, los aldehídos se funcionalizaron utilizando la aminación reductora, el tiol-eno y las químicas oximas.
• Se aplicó la química TACO para la secuenciación fluorescente de una sola molécula y el análisis proteómico de los sitios Kme2.

Principales resultados:

• TACO etiquetó con éxito péptidos y proteínas Kme2 en lisatos celulares complejos con varias cargas útiles (etiquetas de afinidad, fluoróforos).
• El análisis proteómico identificó 35 sitios Kme2, incluidos 30 nuevos sitios, en extractos nucleares.
• La fluorescencia de molécula única demostró la utilidad de TACO para la identificación del sitio Kme2.

Conclusiones:

• TACO proporciona una estrategia química única y versátil para modificar covalentemente Kme2.
• Este método facilita la identificación global de las modificaciones postraslacionales de baja abundancia de Kme2 y sus sitios específicos.