Las pantallas CRISPR de selección positiva revelan un bolsillo farmacológico en una oligosacariltransferasa requerida...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biología celular
• La bioquímica

Sus antecedentes:

• La señalización del factor nuclear kappa B (NF-κB) es crucial en las enfermedades inflamatorias.
• Los lipopolisacáridos (LPS) activan la NF-κB a través del receptor tipo Toll 4 (TLR4).
• El complejo oligosacariltransferasa OST-A está involucrado en la función de TLR4.

Objetivo del estudio:

• Para aclarar el mecanismo de la inhibición de NGI-1 de los complejos OST.
• Comprender el papel de la N-glucosilación en la función TLR4.
• Para identificar STT3A como un objetivo para NGI-1.

Principales métodos:

• Exámenes de CRISPR-Cas9 de todo el genoma en células tratadas con LPS.
• Las pantallas del editor de bases CRISPR para las variantes STT3A resistentes a NGI-1.
• Estudios con microscopía criolectrónica.

Principales resultados:

• TLR4 requiere OST-A para la N-glucosilación y la localización en la superficie celular.
• NGI-1 inhibe los complejos OST al unirse al sitio catalítico de STT3A.
• NGI-1 atrapa el sustrato donante dolichil-PP-GlcNAc2-Man9-Glc3, lo que indica una inhibición no competitiva.

Conclusiones:

• NGI-1 actúa como un inhibidor no competitivo de STT3A.
• Este estudio proporciona una base para el desarrollo de inhibidores específicos de STT3A.
• La edición de bases CRISPR y los estudios estructurales son herramientas poderosas para definir los mecanismos de las drogas.