La espectrometría de afinidad reversiblemente reactiva permite la identificación de enlaces de péptidos covalentes

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología Química
• Proteomía

Sus antecedentes:

• Los enlaces de péptidos covalentes son cruciales como sondas basadas en la actividad y como inhibidores terapéuticos irreversibles.
• Los métodos existentes carecen de una selección de afinidad rápida, sin etiquetas y sintonizable para identificar estos enlaces de bibliotecas sintéticas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una plataforma novedosa, rápida, sin etiquetas y ajustable para la identificación de enlaces de péptidos covalentes.
• Para permitir el enriquecimiento y la secuenciación de los aglutinantes de péptidos covalentes contra dianas de proteínas nativas.

Principales métodos:

• Desarrollo de la plataforma ReAct-ASMS (espectrometría de masas por selección de afinidad reversible).
• Utilización de péptidos mixtos que contienen disulfuro para la formación de conjugados peptídico-proteínicos reversibles.
• Utilizando espectrometría de masas en tándem de alta resolución (MS/MS) para la secuenciación después de la reducción.

Principales resultados:

• Identificación exitosa de los aglutinantes de péptidos covalentes contra las oncoproteínas HPV16 E6 y Pin1.
• Se ha demostrado un enlace eficiente y selectivo de Cys58 de E6 y Cys113 de Pin1.
• Validación de la capacidad de la plataforma para identificar enlaces covalentes selectivos para diversos objetivos.

Conclusiones:

• ReAct-ASMS proporciona una plataforma robusta para el descubrimiento de enlaces de péptidos covalentes.
• La plataforma facilita el desarrollo terapéutico preclínico al permitir la identificación de inhibidores específicos.
• Este enfoque mejora la línea de descubrimiento de terapias covalentes.