La espectrometría de masas de detección de carga revela heterogeneidad conformacional en agregados de anticuerpos...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Química analítica
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• La agregación de proteínas es un problema crítico en el desarrollo terapéutico, que afecta a la eficacia y la seguridad.
• La caracterización de grandes agregados de anticuerpos y sus conformaciones es un desafío con técnicas analíticas estándar.

Objetivo del estudio:

• Evaluar la espectrometría de masas de detección de carga (CDMS) para el análisis de grandes agregados de anticuerpos monoclonales (mAb).
• Comparar el CDMS con métodos convencionales como el MS nativo, el SEC y el CE-SDS para la caracterización agregada.

Principales métodos:

• Se utilizó la espectrometría de masas nativa (MS) para analizar un complejo pentamérico mAb.
• Se empleó la espectrometría de masas de detección de carga (CDMS) para detectar y caracterizar oligómeros individuales y agregados de orden superior.
• Para el análisis comparativo se utilizaron la cromatografía de exclusión de tamaño (SEC) y la electroforesis capilar-SDS (CE-SDS).

Principales resultados:

• CDMS resolvió oligómeros individuales de mAb hasta una masa de ~2,4 MDa (trímero pentámero de mAb).
• Los métodos convencionales no detectaron ni resolvieron los agregados intermedios y las especies de orden superior.
• CDMS identificó conformaciones distintas de oligómeros mAb, que no eran discernibles por otras técnicas debido a las diferencias en las extensiones de carga.

Conclusiones:

• CDMS ofrece ventajas significativas para la determinación precisa de la masa y el análisis conformacional de grandes agregados de anticuerpos.
• El CDMS permite investigar los cambios estructurales en los agregados de proteínas en etapa temprana, cruciales para comprender las vías de agregación.