Estrategia eficiente para descubrir aptameros de ADN contra las proteínas de la superficie celular de baja abundancia...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Biología molecular
• Diagnóstico

Sus antecedentes:

• Los aptameros son sondas de reconocimiento molecular cruciales para las proteínas de la superficie celular en el diagnóstico y la terapia.
• La selección de aptameros contra proteínas de baja abundancia in situ, especialmente a partir de muestras escasas, es un desafío significativo.

Objetivo del estudio:

• Presentar un método de selección de aptamer de una sola ronda y una sola célula (selección DiDS) para superar las limitaciones en el descubrimiento de aptamer.
• Permitir la identificación de aptameros dirigidos a las proteínas de la superficie celular en una amplia gama de niveles de expresión.

Principales métodos:

• Desarrolló la selección de secuenciación digital de ADN (DiDS), una estrategia de selección de aptamer de una sola ronda y una sola célula.
• Incorpora una tarjeta de identificación molecular por plantilla de ADN para mitigar los sesgos de amplificación por PCR.
• Se aplicó la selección DiDS a líneas celulares, muestras clínicas y neuronas.

Principales resultados:

• Se generaron con éxito aptameros de alta calidad contra varios tipos de células y muestras clínicas utilizando la selección DiDS.
• Los aptameros seleccionados por DiDS reconocieron proteínas con diversos niveles de abundancia, a diferencia de las selecciones de múltiples rondas que favorecen objetivos de alta abundancia.
• El perfilado de la superficie celular a nivel de una sola célula reveló patrones moleculares únicos para cada línea celular utilizando un grupo de aptamer enriquecido.

Conclusiones:

• La selección de DiDS es un enfoque simplificado para la generación rápida de moléculas de reconocimiento específicas dirigidas a las proteínas de la superficie celular.
• Este método es prometedor para el perfil celular, la identificación específica de la sonda y el descubrimiento de biomarcadores.
• Permite la selección de aptamer contra objetivos de baja abundancia, ampliando las aplicaciones en medicina de precisión.