La pantalla CRISPR de todo el genoma en células T humanas revela reguladores de FOXP3

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Biología celular
• Regulación genética

Sus antecedentes:

• Las células T reguladoras (Treg), definidas por la expresión de FOXP3, son vitales para la tolerancia inmune y la homeostasis.
• Los métodos actuales para generar células Treg inducidas (iTreg) in vitro enfrentan desafíos con la estabilidad celular, lo que limita su aplicación terapéutica para enfermedades autoinmunes.
• La comprensión de las redes genéticas que rigen la diferenciación de Treg es esencial para desarrollar terapias basadas en células más efectivas.

Objetivo del estudio:

• Identificar nuevos factores reguladores de genes que influyen en la inducción de FOXP3 en las células T humanas.
• Caracterizar el papel de los reguladores identificados en la diferenciación, estabilidad y función de las células iTreg.
• Evaluar el potencial terapéutico de manipular estos reguladores en modelos preclínicos de enfermedades autoinmunes.

Principales métodos:

• Pantalla de pérdida de función CRISPR en todo el genoma en células T humanas primarias para identificar genes reguladores FOXP3.
• Perturb-seq (Perturb-icCITE-seq) para el análisis de resolución de una sola célula de perturbaciones genéticas.
• Inducción in vitro de las células iTreg y evaluación de su estabilidad y función.
• Evaluación in vivo de las células iTreg abladas por RBPJ en un modelo humanizado de ratón de enfermedad de injerto contra huésped.

Principales resultados:

• El complejo represor RBPJ-NCOR fue identificado como un nuevo regulador negativo de la expresión de FOXP3.
• El knockout de RBPJ mejoró la diferenciación y función de las células iTreg, promoviendo la expresión de FOXP3 a través de la desmetilación del ADN del potenciador de FOXP2 en el SNC.
• La deficiencia de RBPJ condujo a un aumento de la estabilidad fenotípica de las células iTreg.
• La sobreexpresión de RBPJ suprimió la inducción de FOXP3 mediante la modulación de la acetilación de histonas de FOXP3 a través de HDAC3.
• Las células iTreg abladas por RBPJ demostraron una supresión superior de la enfermedad xenogénica de injerto contra huésped en un modelo de ratón humanizado.

Conclusiones:

• El complejo RBPJ-NCOR es un regulador crítico y específico del contexto de la inducción de FOXP3 y la estabilidad de las células iTreg.
• Dirigirse a RBPJ ofrece una estrategia prometedora para mejorar la eficacia de las terapias basadas en células iTreg para enfermedades autoinmunes.
• Estos hallazgos proporcionan nuevos conocimientos sobre los mecanismos reguladores de FOXP3 y avanzan en el potencial de la terapia celular adoptiva.