Aislamiento de vesículas extracelulares de alto rendimiento utilizando cromatografía de exclusión de tamaño basada en...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• La nanomedicina
• La bioquímica

Sus antecedentes:

• Las vesículas extracelulares (EV) son biomarcadores prometedores que se encuentran en biofluidos como el plasma.
• Los métodos actuales de aislamiento de EV, como la cromatografía de exclusión de tamaño (SEC), carecen del rendimiento para aplicaciones clínicas.
• El aislamiento de EV reproducible y escalable es crucial para el descubrimiento y el diagnóstico de biomarcadores.

Objetivo del estudio:

• Adaptar el SEC a un formato basado en placas para aumentar el rendimiento.
• Desarrollar una plataforma automatizada para el aislamiento reproducible de EV a partir de muestras clínicas.
• Para permitir el análisis de alto rendimiento de los biomarcadores EV.

Principales métodos:

• Adaptado SEC a un formato de placa de 24 pozos utilizando fritas envasadas con resina.
• Separación optimizada de EV de proteínas libres (por ejemplo, albúmina) mediante la medición de marcadores de EV (CD63, CD81).
• Automatizado el proceso SEC basado en placas utilizando plataformas de manejo de líquidos.

Principales resultados:

• Se ha demostrado la separación exitosa de las EV de las proteínas libres en el formato de placa de 24 pozos.
• Se logró una alta reproducibilidad con la plataforma automatizada.
• Se aplicó con éxito la plataforma automatizada para analizar las tetraspaninas CD63 y CD81 en muestras de plasma.

Conclusiones:

• El método SEC automatizado basado en placas desarrollado proporciona una solución escalable y reproducible para el aislamiento de EV.
• Esta plataforma aumenta significativamente el rendimiento, permitiendo cientos de muestras por día.
• El método facilita el descubrimiento de biomarcadores EV y las aplicaciones de diagnóstico en entornos clínicos.