Desarrollo de la sonda mDZ-RhoBAST para imágenes de superresolución de la desmetilación de FTO en células vivas

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Imágenes celulares
• La bioquímica

Sus antecedentes:

• La microscopia de localización de una sola molécula (SMLM) permite la visualización de alta resolución de las biomoléculas.
• Los aptameros fluorescentes de iluminación (FLAP) facilitan el etiquetado de ARN y la obtención de imágenes de una sola molécula en células vivas.
• La imagen de las actividades de ARN reguladas por proteínas in vivo sigue siendo un desafío.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una nueva sonda de ácido nucleico para visualizar procesos de desmetilación de ARN en células vivas.
• Permitir imágenes en tiempo real y de súper resolución de la masa grasa y la actividad de la proteína asociada a la obesidad (FTO).
• Proporcionar información sobre la dinámica de la desmetilación in vivo regulada por el FTO.

Principales métodos:

• Desarrollo de mDZ-RhoBAST, una sonda que combina una enzima de ADN modificada con 6mA y RhoBAST FLAP.
• La activación de la enzima DNA por FTO, que conduce a la liberación de RhoBAST y a la unión de fluorógeno.
• Aplicación de SMLM para la obtención de imágenes de superresolución de la desmetilación endógena de FTO.

Principales resultados:

• Visualización exitosa del proceso de desmetilación mediado por FTO en células vivas.
• Se lograron imágenes en tiempo real de superresolución de la actividad endógena de FTO.
• La sonda mDZ-RhoBAST demostró su eficacia en el seguimiento de la dinámica de desmetilación in vivo.

Conclusiones:

• mDZ-RhoBAST es una herramienta poderosa para estudiar la desmetilación del ARN por FTO en células vivas.
• Este enfoque ofrece información sin precedentes en tiempo real sobre la regulación epigenética mediada por FTO.
• El estudio avanza la capacidad de SMLM para investigar procesos moleculares dinámicos en entornos celulares.