Detección rápida y sensible del parásito bovino Theileria annulata basada en la tecnología ERA-CRISPR/Cas12a

Área de la Ciencia:

• Parasitología veterinaria
• Diagnóstico molecular
• Salud del ganado

Sus antecedentes:

• Theileria annulata causa pérdidas económicas significativas en el ganado en todo el mundo.
• Los diagnósticos precisos y rápidos son cruciales para el control de la teileriosis bovina, especialmente en las regiones con recursos limitados.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo de diagnóstico rápido, fiable y sensible para Theileria annulata.
• Integrar la amplificación enzimática de la recombinasa (ERA) con la tecnología CRISPR/Cas12a para la detección visual.

Principales métodos:

• Cribado de pares de primeras y candidatos de ARN CRISPR (crRNA), optimizando el protocolo de ERA.
• Utilización de la iluminación UV y azul para la interpretación visual de los resultados.
• Validación mediante muestras de sangre bovina y comparación con la PCR convencional.

Principales resultados:

• El conjunto de primeras F3/R3 y la combinación crRNA1 mostraron un rendimiento óptimo.
• El ensayo logró la amplificación en 20 minutos a 37°C y la detección completa en 40 minutos.
• Límite de sensibilidad de 10 copias/μL, 100 veces superior a la PCR; se detectó una mayor prevalencia en muestras de campo.

Conclusiones:

• El ensayo integrado ERA-CRISPR/Cas12a proporciona una herramienta de diagnóstico sensible y rápida para Theileria annulata.
• Esta tecnología ofrece un apoyo técnico crucial para aplicaciones de campo en entornos con recursos limitados.
• El ensayo responde eficazmente a la necesidad de un diagnóstico preciso de la teileriosis bovina.