Desarrollo y evaluación clínica de una nueva prueba SHERLOCK para Mycoplasma genitalium

Área de la Ciencia:

• Microbiología
• Diagnóstico molecular
• Enfermedades infecciosas

Sus antecedentes:

• * Mycoplasma genitalium (MG) es un patógeno de transmisión sexual relacionado con la uretritis y la prostatitis en los hombres.
• * Las pruebas actuales de amplificación de ácido nucleico (NAAT) son estándares de diagnóstico de oro, pero carecen de accesibilidad al punto de atención (POCT) debido a los requisitos de equipo especializado.
• * Las opciones limitadas de POCT dificultan el diagnóstico y el tratamiento oportunos, lo que contribuye potencialmente a la transmisión de MG.

Objetivo del estudio:

• * Desarrollar y validar un método de diagnóstico rápido, sensible y accesible en el punto de atención para Mycoplasma genitalium.
• * Para utilizar la plataforma SHERLOCK (Desbloqueo de Reporteros Enzimáticos Específicos de Alta Sensibilidad), que combina CRISPR-Cas13a y la amplificación isotérmica, para la detección de MG.
• * Para dirigir el gen Mg219 para la identificación específica y fiable de MG.

Principales métodos:

• * Desarrollo de un nuevo ensayo SHERLOCK dirigido al gen Mg219 en Mycoplasma genitalium.
• * Optimización de la extracción de ADN crudo de muestras de orina clínicas para su uso directo en el ensayo.
• * Evaluación del ensayo SHERLOCK utilizando 128 muestras de orina de primer vaciado de pacientes masculinos con sospecha de uretritis por MG en Japón.
• * Comparación de los resultados de SHERLOCK con el ensayo cobas TV/MG y la PCR cuantitativa interna.
• * Detección de resultados mediante ensayo de flujo lateral para su interpretación visual en 60 minutos.

Principales resultados:

• * El ensayo SHERLOCK desarrollado demostró un límite de detección de 10 copias/reacción sin reactividad cruzada con otros patógenos.
• * La evaluación clínica mostró un acuerdo general del 91,4% con la prueba PCR de cobas TV/ MG, con un acuerdo positivo del 79,6% y negativo del 100%.
• * El ensayo logró una detección visual en 60 minutos, lo que indica su potencial para una rápida aplicación en el punto de atención.
• * SHERLOCK mostró un rendimiento superior en comparación con la PCR cuantitativa en este estudio.

Conclusiones:

• * El nuevo ensayo SHERLOCK presenta una herramienta prometedora para la detección rápida y sensible de Mycoplasma genitalium.
• * La capacidad del ensayo para utilizar ADN crudo y proporcionar resultados visuales a través del flujo lateral lo hace adecuado para pruebas en el punto de atención.
• * Se necesitan estudios prospectivos adicionales para confirmar la utilidad clínica y la aplicabilidad generalizada de este método de diagnóstico basado en SHERLOCK para la MG.