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Updated: Sep 10, 2025

Mitochondria and Endoplasmic Reticulum Imaging by Correlative Light and Volume Electron Microscopy
Published on: July 20, 2019
Imágenes de las envolturas nucleares utilizando el AFM / microscopía de fluorescencia correlativa
Emilie Costes1, Anthony Vial2, Christine Doucet3
1Centre de Biologie Structurale, INSERM, CNRS, University of Montpellier, Montpellier, France.
Este estudio presenta un nuevo método para la preparación de envolturas nucleares (NE) a partir de células de mamíferos, preservando la estructura del complejo de poros nucleares (CPN). Esta técnica permite obtener imágenes de alta resolución de las membranas nucleares internas y externas utilizando microscopía de fuerza atómica (AFM).
Área de la Ciencia:
- Biología celular
- La biofísica
- Microscopía
Sus antecedentes:
- La envoltura nuclear (NE) es una estructura eucariota crucial con membranas internas y externas.
- Los métodos existentes para la preparación de NE pueden alterar la morfología del complejo de poros nucleares (NPC) debido a la pérdida de tensión de la membrana.
- La microscopía de fuerza atómica (AFM) es una herramienta poderosa para obtener imágenes de estructuras de NE.
Objetivo del estudio:
- Desarrollar un nuevo método para la preparación de envolturas nucleares intactas a partir de células de mamíferos en cultivo.
- Para preservar la estructura nativa de los complejos de poros nucleares (NPC) durante la preparación de la muestra.
- Permitir imágenes de alta resolución de las membranas nucleares internas y externas utilizando AFM y microscopía correlativa.
Principales métodos:
- Extracción de núcleos de células de mamíferos en cultivo y su fijación en sustratos de vidrio.
- Apertura suave de los núcleos para mantener la tensión de la membrana y la integridad del NPC.
- Inmunoetiquetado combinado con AFM y microscopía directa de reconstrucción óptica estocástica (dSTORM) para imágenes correlativas.
Principales resultados:
- El nuevo método de preparación preserva con éxito la tensión de la membrana NE y la estructura NPC.
- Se obtienen imágenes AFM de alta resolución de las membranas nucleares internas y externas.
- Las imágenes de AFM/dSTORM proporcionan información estructural y molecular detallada.
Conclusiones:
- Este protocolo ofrece un enfoque sólido para el estudio de NEs y NPC con morfología preservada.
- El método es adaptable a varios modelos celulares, incluidas las células y los tejidos vegetales.
- Facilita técnicas avanzadas de imágenes correlativas para obtener información biológica más profunda.

