Protocolo para la generación y la inmunización de rebanadas gruesas de tejido pulmonar murino

Área de la Ciencia:

• Investigación pulmonar
• Biología celular
• Histología

Sus antecedentes:

• Las rebanadas pulmonares de precisión (PCLS) mantienen la complejidad estructural y celular del pulmón.
• Las PCLS facilitan el análisis espacial de las poblaciones de células residentes del pulmón.
• Los métodos existentes pueden no preservar completamente la integridad celular para el análisis detallado.

Objetivo del estudio:

• Presentar un protocolo detallado para la generación de PCLS de los pulmones de ratón.
• Para permitir una posterior tinción inmunofluorescente para el análisis de la expresión proteica.
• Para optimizar la preparación de PCLS para la preservación de reporteros fluorescentes endógenos.

Principales métodos:

• Preparación de animales e instrumentos para la generación de PCLS.
• Generación de cortes de pulmón de precisión a partir de pulmones de ratón.
• Los protocolos de tinción inmunofluorescentes para ACTA2 y MKI-67, preservando los reporteros endógenos.

Principales resultados:

• Generación exitosa de PCLSs de los pulmones de ratón.
• Se ha demostrado la tinción inmunofluorescente para ACTA2.
• Co-coloración de ACTA2 y MKI-67 mientras se mantiene la fluorescencia endógena.

Conclusiones:

• El protocolo presentado genera efectivamente PCLS adecuados para la inmunofluorescencia detallada.
• Este método permite el análisis espacial de la expresión de proteínas en los tejidos pulmonares.
• El protocolo conserva reporteros fluorescentes endógenos, mejorando el análisis de múltiples marcadores.