Identificación de moduladores selectivos de moléculas pequeñas de procesamiento de ARNm utilizando una plataforma de...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Descubrimiento de drogas
• Desarrollo de ensayos

Sus antecedentes:

• El cribado de alto rendimiento (HTS) con ensayos basados en células multiplexadas es crucial para identificar moduladores de procesos biológicos.
• El descubrimiento de pequeñas moléculas que modulan el procesamiento de ARNm requiere plataformas de detección sensibles y específicas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo HTS basado en perlas multiplexado para cuantificar múltiples transcripciones de genes objetivo simultáneamente.
• Identificar moduladores selectivos de moléculas pequeñas de procesamiento de ARNm utilizando un nuevo ensayo QuantiGene en la plataforma Luminex.

Principales métodos:

• Desarrolló un ensayo QuantiGene basado en cuentas multiplexadas en la plataforma Luminex para la cuantificación simultánea de la transcripción génica.
• Implementó una tubería de llamadas de doble normalización (basada en placas y pozos) para mitigar los artefactos de cribado y la variabilidad de las placas.
• Hits validados utilizando un ensayo de PCR en tiempo real (qPCR) de concentración y respuesta de cuatro puntos ortogonal en una línea celular relevante para la enfermedad.

Principales resultados:

• El ensayo identificó con éxito compuestos únicos que modulan selectivamente genes objetivo individuales involucrados en el procesamiento de ARNm.
• Una estrategia de doble normalización redujo los falsos negativos y mejoró las tasas de confirmación de aciertos.
• El análisis de motivos químicos reveló andamios conocidos y nuevos enriquecidos para objetivos específicos, con solo el 5% de los activos que muestran una actividad amplia en tres objetivos.

Conclusiones:

• La plataforma HTS multiplexada desarrollada es una estrategia escalable y confiable para identificar moduladores selectivos de moléculas pequeñas de procesamiento de ARNm.
• El ensayo demuestra robustez y relevancia traslacional, aplicable al descubrimiento temprano de fármacos.
• Los resultados ponen de relieve la capacidad de la plataforma para detectar moduladores altamente selectivos de vías biológicas complejas.