Desarrollo de un método de amplificación isotérmica mediado por bucle visual a ojo desnudo modificado por capilares...

Área de la Ciencia:

• Diagnóstico molecular
• Técnicas de amplificación isotérmica
• Detección de enfermedades virales

Sus antecedentes:

• La aparición mundial del virus del mpox (MPXV) y del virus de la chikungunya (CHIKV) requiere herramientas de diagnóstico rápidas.
• Los métodos de diagnóstico existentes a menudo requieren equipo especializado y personal capacitado, lo que limita su uso en entornos con recursos limitados.
• La prevención de la transmisión transfronteriza y la propagación comunitaria depende de la identificación oportuna y precisa de las infecciones virales.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo de amplificación isotérmica por bucle modificado por capilares (LAMP) para la detección sensible y rápida de MPXV y CHIKV.
• Crear una herramienta de diagnóstico de interpretación visual y rentable adecuada para su despliegue en el campo.
• Minimizar los riesgos de contaminación y los falsos positivos asociados con los métodos de diagnóstico convencionales.

Principales métodos:

• Se diseñó un ensayo LAMP basado en capilares utilizando capilares como recipientes de reacción para reducir el uso de reactivo y simplificar el funcionamiento.
• El ensayo se dirige a genes específicos: F13 para el MPXV y nsP1 para el CHIKV. El virus Vaccinia (VACV) fue utilizado como sustituto para la detección del virus Orthopox.
• Se integró el tinte azul leuco-hidroxinaftol (LHNB) para la interpretación visual directa de los resultados sin instrumentación especializada.

Principales resultados:

• El ensayo demostró una alta sensibilidad analítica: 10 copias/μL para el MPXV F13 y 6 copias/μL para el CHIKV nsP1.
• Los límites de detección para el virus Vaccinia infeccioso (VACV) fueron de 0,64 PFU (intracelular) y 8 PFU (extracelular).
• Los límites de detección para el virus infeccioso de Chikungunya (CHIKV) fueron de 0,3 PFU (intracelular) y 0,068 PFU (extracelular).
• El ensayo LAMP capilar mostró una sensibilidad más alta que la qPCR estándar, con resultados disponibles en 30 minutos.
• El método requiere un equipo mínimo, es rentable y proporciona compatibilidad de lectura visual.

Conclusiones:

• El ensayo LAMP modificado por capilaridad es una herramienta de diagnóstico altamente sensible, rápida y rentable para MPXV y CHIKV.
• Su diseño minimiza los riesgos de contaminación y simplifica la operación, lo que lo hace adecuado para entornos con recursos limitados.
• Este ensayo proporciona una solución desplegable para las estaciones de cuarentena fronterizas y la atención primaria de salud, ayudando en la interceptación y contención temprana de brotes.