La proteómica espacial utilizando BiFCPL identifica los reguladores de la formación del DMV involucrados en la...

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología molecular
• Biología celular

Sus antecedentes:

• Los betacoronavirus dependen de la maquinaria de las células huésped para replicarse.
• Las vesículas de doble membrana (DMV) son sitios de replicación esenciales para los coronavirus, pero los factores de hospedaje involucrados no se comprenden completamente.

Objetivo del estudio:

• Para identificar las proteínas del huésped involucradas en la formación de vesículas de doble membrana inducidas por el SARS-CoV-2.
• Investigar el papel de los factores huésped identificados en la biogénesis del DMV y la replicación del coronavirus.

Principales métodos:

• Se utilizó una estrategia de etiquetado de proximidad basada en la complementariedad de fluorescencia bimolecular (BiFCPL) para perfilar el proteoma DMV.
• Las proteínas no estructurales coexpresadas del SARS-CoV-2 (NSP3 y NSP4) para inducir la formación de DMV.
• Se confirmó la localización de proteínas e interacciones usando microscopía y manipulación genética.

Principales resultados:

• Se identificaron 62 proteínas huésped de alta confianza asociadas con los DMV, incluidas cinco proteínas localizadas en el retículo endoplasmático que interactúan con NSP3 / NSP4.
• Se ha demostrado que GRAMD1B y TEX2 se reclutan en los DMV a través de NSP3/NSP4.
• Se demostró que el agotamiento de GRAMD1B o TEX2 conduce a la ampliación de los DMV y al deterioro de la replicación del coronavirus.

Conclusiones:

• GRAMD1B y TEX2 son nuevos factores huésped esenciales para la formación adecuada de DMV y la replicación del coronavirus.
• Estos hallazgos proporcionan información sobre las interacciones entre el virus huésped y los posibles objetivos de las terapias antivirales.