Detección simultánea de HEV, HAstV y SaV en mariscos bivalvos mediante un nuevo método de RT-qPCR en tiempo real

Área de la Ciencia:

• Detección de patógenos transmitidos por los alimentos
• Diagnóstico molecular
• Microbiología de la salud pública

Sus antecedentes:

• El virus de la hepatitis E (HEV), el astrovirus humano (HAstV) y el sapovirus (SaV) son causas importantes de brotes de enfermedades transmitidas por los alimentos.
• Los métodos de detección precisos y rápidos son cruciales para el seguimiento y el control de estos patógenos virales en los suministros de alimentos.
• Los métodos de detección existentes pueden carecer de capacidad para identificar simultáneamente múltiples virus transmitidos por los alimentos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un ensayo de PCR cuantitativo de fluorescencia en tiempo real (RT-qPCR) rápido y sensible.
• Permitir la detección simultánea de HEV, HAstV y SaV en matrices alimentarias, en particular en mariscos bivalvos.
• Evaluar la prevalencia de estos virus en muestras de mariscos bivalvos de la provincia de Hebei.

Principales métodos:

• Desarrollo de un ensayo cuádruple de RT-qPCR en tiempo real que incorpore el fago MS2 como control de proceso.
• Optimización de los parámetros experimentales y extracción de ácido nucleico mediante el método de precipitación y cloroformo de la proteinasa K-PEG 8000.
• Aplicación del ensayo a 354 muestras de mariscos bivalvos y comparación con RT-qPCR único en un subconjunto de muestras.

Principales resultados:

• El cuádruple RT-qPCR demostró una alta sensibilidad con límites de detección de 10^3 copias/μL para HEV, HAstV, ARN MS2 y 10^2 copias/μL para SaV.
• Se confirmó una excelente reproducibilidad con coeficientes de variación intra e inter-método inferiores al 3,0% y un tiempo total de detección inferior a 90 minutos.
• En 354 muestras de mariscos bivalvos, las tasas positivas fueron del 9,60% para el HEV, del 3,67% para el HAstV y del 6,78% para el SaV, con varias infecciones mixtas detectadas. El ensayo cuádruple mostró un alto acuerdo (98,67% en general) con los ensayos individuales.

Conclusiones:

• El método desarrollado de RT-qPCR cuádruple en tiempo real proporciona una herramienta rápida y sensible para la detección simultánea de HEV, HAstV y SaV.
• Este método es eficaz para detectar estos virus transmitidos por los alimentos en los mariscos bivalvos, lo que contribuye a mejorar la vigilancia de la inocuidad de los alimentos.
• La eficiencia y precisión del ensayo apoyan su aplicación en programas de monitoreo de rutina para patógenos transmitidos por los alimentos.