Cribado versátil y de alto rendimiento basado en CATCHFIRE para la secreción de proteínas en Bacillus subtilis

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Biología molecular
• Microbiología

Sus antecedentes:

• La optimización de la secreción de proteínas en Bacillus subtilis es crucial para las aplicaciones industriales.
• Los métodos actuales de cribado de alto rendimiento a menudo están limitados por ensayos dependientes de la actividad.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo método de cribado versátil y de alto rendimiento para cuantificar la secreción de proteínas en Bacillus subtilis.
• Para superar las limitaciones del cribado dependiente de la actividad de las proteínas secretadas.

Principales métodos:

• Desarrolló el sistema CATCHFIRE (conexión asistida químicamente de la quimera por reconocimiento inducido por fluorogénico).
• Fusionó el péptido FIREtag para detectar proteínas basadas en la fluorescencia con FIREmate y match540.
• Aplicó el método para monitorear la secreción de cinco proteínas y optimizar la secreción de nanobody.

Principales resultados:

• Demostró la viabilidad del sistema CATCHFIRE para el control de la secreción de proteínas.
• Se optimizó con éxito la secreción de nanobodies mediante el cribado de péptidos de señal y bibliotecas de mutagénesis aleatoria.
• Se estableció un ensayo basado en la fluorescencia para cuantificar las proteínas secretadas.

Conclusiones:

• El sistema CATCHFIRE proporciona un método versátil y de alto rendimiento para optimizar la secreción de proteínas en Bacillus subtilis.
• Este enfoque mejora la eficiencia de la ingeniería y producción de proteínas en los sistemas microbianos.