Despliegue inducido por colisión de iones de proteína de alto m / z nativos dentro de un espectrómetro de movilidad...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Química analítica
• Biología estructural

Sus antecedentes:

• La espectrometría de masa nativa (nMS) junto con la espectrometría de movilidad iónica (IMS) ofrece información rápida sobre la conformación y la estabilidad de las proteínas.
• Los métodos anteriores de despliegue inducido por colisión (CIU) en los instrumentos timsTOF se limitaban a proteínas más pequeñas (< 29 kDa).

Objetivo del estudio:

• Optimizar la configuración del instrumento para mejorar la transmisión y el despliegue de iones de proteínas más grandes utilizando nMS-IMS.
• Extender la aplicabilidad del despliegue inducido por colisión (CIU) a una gama más amplia de tamaños y complejos de proteínas.

Principales métodos:

• Se utilizó un instrumento Bruker timsTOF para la espectrometría de masa nativa (nMS) y la espectrometría de movilidad iónica (IMS).
• Parámetros de instrumentos optimizados para permitir la transmisión de iones de hasta 8.000 Th.
• Aplicación de la activación por colisión dentro del módulo de captura para el despliegue inducido por colisión (CIU).

Principales resultados:

• Proteínas transmitidas y desplegadas con éxito hasta 8.000 Th.
• Se ha demostrado el despliegue de dímeros de tipo nativo (superoxida dismutasa, β-lactoglobulina) y un monómero de 45 kDa (ovalbúmina).
• Se observó un desarrollo limitado para la albúmina sérica bovina y ningún desarrollo para la inmunoglobulina G, lo que indica limitaciones de la técnica actual.

Conclusiones:

• La técnica optimizada de nMS-IMS CIU amplía significativamente el rango de tamaño de las proteínas susceptibles de análisis estructural.
• El método proporciona datos valiosos sobre la conformación y estabilidad de las proteínas de tamaño medio y los dímeros.
• Se necesitan avances adicionales para lograr el despliegue de proteínas muy grandes como la inmunoglobulina G.