Video Experimental Relacionado
Updated: Jun 16, 2026
An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry
Published on: April 17, 2018
Caracterización de pequeñas sustancias terapéuticas basadas en ARN y sus impurezas de proceso mediante cromatografía
Silvia Millán-Martín1, Felipe Guapo1, Sara Carillo1
1National Institute for Bioprocessing Research & Training, Characterisation and Comparability Laboratory, Fosters Avenue, Mount Merrion, Blackrock, Dublin, A94 X099, Ireland.
Este estudio presenta un método analítico sensible utilizando pares de iones de fase inversa LC-HRMS/MS para caracterizar terapias de ARN modificado. El método verifica con precisión las secuencias e identifica las impurezas en los oligonucleótidos antisenso de una sola cadena (SS-ASOs).
Área de la Ciencia:
- Química analítica
- Ciencias farmacéuticas
- La bioquímica
Sus antecedentes:
- Los oligonucleótidos son una clase significativa de fármacos emergentes que requieren métodos analíticos sólidos para el control de calidad.
- Las agencias reguladoras exigen la confirmación empírica de la estructura primaria del fármaco basada en ARN, incluidos los terminales y las modificaciones, para la seguridad y la eficacia.
- La caracterización de los oligonucleótidos antisentido de cadena única modificados químicamente (SS-ASOs) presenta desafíos analíticos.
Objetivo del estudio:
- Desarrollar y validar un método sensible de espectrometría de masas de alta resolución (HRMS/MS) para la caracterización de ss-ASOs modificados.
- Para evaluar un método LC de fase inversa de pares de iones basados en aminas con una fuente de IES leve para el perfil de impurezas.
- Evaluar la capacidad del método para la verificación de secuencias e identificación de impurezas en terapias basadas en ARN.
Principales métodos:
- Cromatografía líquida de fase inversa de pares de iones basados en aminas (IP-RPLC) junto con espectrometría de masas de alta resolución (HRMS/MS).
- Se utilizó una fuente de ionización por electrospray leve (ESI) y un reactivo de emparejamiento iónico con hidrofobia moderada.
- Se analizaron ss-ASOs de segunda y tercera generación con varias modificaciones de la columna vertebral, el azúcar (2'-posición) y la base.
Principales resultados:
- El método HRMS/MS desarrollado logró una alta sensibilidad y precisión de masa para el análisis de SS-ASOs intactos y de secuenciación.
- El análisis intacto permitió la detección y cuantificación de productos completos e impurezas, incluidos los degradantes, incluso sin una separación cromatográfica completa.
- Las impurezas más frecuentes identificadas fueron la conversión de fosfodiéster (PO) y los acortadores de secuencias de falla.
Conclusiones:
- El método IP-RPLC-HRMS/MS es eficaz para la verificación de la secuencia y la identificación de las impurezas de los ss-ASOs modificados.
- El método optimizado reduce los aductos de pares de iones y las impurezas en la fuente, mejorando la precisión de la caracterización.
- Este enfoque analítico apoya el control de calidad de los medicamentos terapéuticos basados en ARN.
