Una herramienta de análisis de imágenes de fluorescencia in vivo para la cuantificación de la actividad de la...

Área de la Ciencia:

• Ecotoxicología
• Biología celular
• Ciencias del medio ambiente

Sus antecedentes:

• Creciente necesidad de metodologías de nuevo enfoque (NAM) en ecotoxicología.
• Limitaciones de los métodos actuales para detectar efectos subletales.
• Importancia de los ensayos sensibles para la salud de los organismos acuáticos.

Objetivo del estudio:

• Demostrar la utilidad de la tinción fluorescente con calceína AM en un ensayo automatizado para la detección de efectos subletales en *Daphnia magna*.
• Validar y aplicar este nuevo método para evaluar los contaminantes ambientales.
• Establecer una herramienta sensible "in vivo" para la evaluación del riesgo ecotoxicológico.

Principales métodos:

• Optimización del procesamiento y la alimentación de muestras para lograr una distribución uniforme de la calceína AM.
• Validación del ensayo utilizando inhibidores conocidos de la esterasa (fosfato de trifenilo, sulfato de netilmicina).
• Aplicación del ensayo de placas multipozo automatizado basado en imágenes a los contaminantes ambientales utilizando microscopía confocal "in vivo".

Principales resultados:

• El ensayo de calceína AM detectó efectos de inhibidores a concentraciones 3-6 veces más bajas que la prueba de inmovilización OCDE 202.
• Todos los contaminantes ambientales analizados inhibieron la actividad de la esterasa.
• Las concentraciones que no producen actividad esterasa se correlacionan con la mortalidad a las 48 horas, indicando sensibilidad.

Conclusiones:

• Calcein AM proporciona una herramienta fluorescente sensible *in vivo* para la detección de efectos químicos subletales en *Daphnia magna*.
• El ensayo automatizado ofrece ventajas para la detección ecotoxicológica de alto rendimiento.
• Este método mejora la capacidad de visualizar procesos intracelulares y evaluar la toxicidad química.