La activación de genes a larga distancia orquestada por una pinza de ADN BisD-CTP similar a ParB en el desarrollo de...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Microbiología
• La genética

Sus antecedentes:

• Los elementos conjugados integradores (ICE) son elementos genéticos móviles que se integran en los genomas bacterianos.
• La transferencia ICE requiere una subpoblación especializada de células para convertirse en transferencia competente.
• Los mecanismos regulatorios que rigen las competencias de transferencia de ICE no se comprenden completamente.

Objetivo del estudio:

• Investigar el papel de la proteína parecida a ParB BisD en la formación de la competencia de transferencia de ICEclc en Pseudomonas putida.
• Para aclarar los mecanismos moleculares por los cuales BisD contribuye a la transferencia de ICE.

Principales métodos:

• La disección genética de ICEclc.
• Microscopía de fluorescencia de una sola célula utilizando proteínas de fusión mCherry-BisD.
• Inmunoprecipitación de la cromatina seguida de secuenciación del ADN (ChIP-seq).
• Ensayos bioquímicos para estudiar la unión de nucleótidos y la hidrólisis por BisD purificado.

Principales resultados:

• Las proteínas de fusión mCherry-BisD forman focos en secuencias parecidas a parS dentro de ICEclc.
• El BisD se acumula en sitios específicos del bisS y se enriquece en torno a los promotores de la transferencia de competencias del ICEclc.
• BisD exhibe deslizamiento sobre el ADN ICE y requiere un dominio único para la activación y transferencia de promotores, interactuando con BisC.
• BisD se une e hidroliza CTP, y la mutación de Arg95 elimina la unión de nucleótidos, la activación del promotor y la transferencia.

Conclusiones:

• BisD es esencial para la formación de la competencia de transferencia de ICEclc en Pseudomonas putida.
• BisD funciona al unirse a sitios específicos de ADN, facilitando la activación del promotor y actuando potencialmente como una abrazadera de ADN.
• El doble papel de BisD en la activación de genes y la unión al ADN destaca su importancia en la regulación de la transferencia de ICE.