Técnicas de preparación y secuenciación de bibliotecas PacBio de alto rendimiento para ADN genómico y TNA

Área de la Ciencia:

• La genómica y la bioinformática
• Biología Molecular y Genética

Sus antecedentes:

• La tecnología de secuenciación PacBio ofrece longitudes de lectura cruciales para cerrar brechas en ensamblajes de genomas completos.
• Se necesitan flujos de trabajo automatizados de preparación de bibliotecas de alto rendimiento para la secuenciación de PacBio para mejorar la eficiencia.

Objetivo del estudio:

• Describir dos métodos de alto rendimiento para la preparación automatizada de bibliotecas para la secuenciación de PacBio.
• Detallar los flujos de trabajo para la preparación, la agrupación y la secuenciación de la biblioteca de ADN genómico codificado y de ADNc en el instrumento Sequel II.

Principales métodos:

• Desarrollo y aplicación de dos métodos distintos de preparación de bibliotecas de alto rendimiento.
• Código de barras de muestras de ADN genómico y ADNc para la secuenciación multiplexada.
• Secuenciación de las bibliotecas preparadas mediante el instrumento PacBio Sequel II.

Principales resultados:

• Las pruebas en 380 muestras de ADN genómico mostraron una tasa de fracaso del 7,4% que requirió una secuenciación repetida.
• Las pruebas en 384 muestras de ácido nucleico Threose dieron como resultado 0 fallas, con un 12,8% que logró una cobertura del genoma < 90%.
• Los métodos se aplicaron con éxito para generar aproximadamente 2.000 secuencias genómicas de ADN y 30.000 de ADNc de muestras clínicas en 2023.

Conclusiones:

• Los métodos de alto rendimiento descritos son efectivos para la preparación de la biblioteca de secuenciación de PacBio.
• Estos flujos de trabajo facilitan la secuenciación genómica y transcriptómica a gran escala de muestras clínicas.
• Los métodos demuestran escalabilidad y utilidad para generar datos genómicos sustanciales.