Amplificación de la recombinasa polimerasa combinada con la tecnología CRISPR/Cas12a para la detección rápida in situ...

Área de la Ciencia:

• Virología veterinaria
• Diagnóstico molecular
• Patología aviar

Sus antecedentes:

• El adenovirus 3 del pato (DAdV-3) causa daño hepático significativo y sangrado en los patos, lo que lleva a altas tasas de morbilidad y mortalidad.
• Las coinfecciones y la falta de vacunas/tratamientos efectivos para el DAdV-3 plantean desafíos sustanciales para la industria de la cría de patos.
• Las herramientas de diagnóstico precisas y rápidas son esenciales para la intervención oportuna y la gestión de la enfermedad.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método de detección rápido, específico y sensible para el adenovirus de pato 3 (DAdV-3).
• Permitir la detección in situ del DAdV-3 sin necesidad de un equipo de laboratorio complejo.

Principales métodos:

• Desarrollo de un ensayo de banda de flujo lateral (LFS) combinado con la amplificación de la polimerasa recombinasa (RPA) y la tecnología CRISPR/Cas12a.
• Se dirige al gen DAdV-3 Fiber-2 para una detección específica.
• Validación con 95 muestras de aves acuáticas y comparación con la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR).

Principales resultados:

• El método RPA-CRISPR/Cas12a-LFS logró un límite de detección bajo de 3,0 copias de genes.
• Se ha demostrado una alta especificidad, sin mostrar reactividad cruzada con otros ocho virus aviares.
• Se obtuvo un 98,95% de consistencia y acuerdo con la qPCR en el análisis de muestras de aves acuáticas, con un tiempo de reacción total de 45 minutos a 37°C.

Conclusiones:

• El método RPA-CRISPR/Cas12a-LFS desarrollado es una herramienta fácil de usar, rápida, sensible y precisa para la detección de DAdV-3 en el sitio.
• Este ensayo tiene un potencial significativo para estrategias eficaces de prevención y control contra el DAdV-3 en la industria del pato.