Las células CHO endógenas con deficiencia de partículas similares a los retrovirus pueden generarse mediante CRISPR o...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Biología molecular
• Biología celular

Sus antecedentes:

• Las partículas similares a los retrovirus (RVLPs) de las secuencias endógenas en las células del ovario del hámster chino (CHO) representan un riesgo de seguridad en la biofabricación.
• Las RVLP se asemejan a los virus de la leucemia de mamíferos, lo que requiere estrategias de mitigación a pesar de la falta de infectividad.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar estrategias de ingeniería genética para interrumpir la producción de RVLP en células CHO.
• Establecer métodos para seleccionar clones de células CHO con deficiencia de RVLP para aplicaciones de biofabricación.

Principales métodos:

• Utilizó la edición de genes CRISPR y shRNA para apuntar a las secuencias de nucleótidos RVLP.
• Se generan anticuerpos específicos para detectar la proteína de la envoltura RVLP (Env) en las superficies de las células CHO.
• Clonas seleccionadas con deficiencia de RVLP basadas en la expresión reducida de la proteína RVLP.

Principales resultados:

• CRISPR y shRNA redujeron efectivamente la producción de RVLP en las células CHO modificadas.
• El cribado basado en anticuerpos facilitó la selección eficiente de clones con deficiencia de RVLP.
• Las células CHO modificadas mantuvieron o aumentaron la producción de partículas recombinantes similares al virus (VLP).

Conclusiones:

• La ingeniería genética ofrece una estrategia viable para mitigar los riesgos de seguridad relacionados con RVLP en la biofabricación derivada de células CHO.
• Este enfoque es particularmente beneficioso para los productos biológicos complejos incompatibles con los métodos tradicionales de eliminación viral.
• Las células CHO con deficiencia de RVLP presentan una plataforma más segura para la producción de bioterápicos.