Preparación de clasificadores basados en cubetas para la clasificación de células microbianas y virus de muestras...

Área de la Ciencia:

• Biología celular
• La genómica
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• Las partículas submicrónicas como las partículas similares a virus (VLP) y las bacterias están en el límite de detección para la mayoría de los citómetros de flujo.
• La clasificación precisa y el análisis genómico posterior de estas pequeñas partículas requieren una preparación meticulosa de los instrumentos y el manejo de las muestras.
• Los protocolos existentes pueden no abordar adecuadamente los desafíos únicos de clasificar y preservar el material genético a partir de muestras tan pequeñas.

Objetivo del estudio:

• Proporcionar un protocolo completo para la preparación de clasificadores de células BD FACSAria (II/III/Fusión) para la clasificación de muestras submicrónicas.
• Establecer un flujo de trabajo para laboratorios de recursos compartidos y investigadores individuales que manejen muestras como VLP y bacterias.
• Asegurar la recuperación de ADN de alta calidad para aplicaciones posteriores, como la amplificación y secuenciación de todo el genoma.

Principales métodos:

• Instrucciones detalladas para la preparación del sistema fluídico del clasificador de células BD FACSAria II/III/Fusion, incluida la preparación del fluido de la funda y la descontaminación del instrumento.
• Protocolos para la limpieza y el mantenimiento de los tanques, contenedores y boquillas de instrumentos para minimizar la contaminación.
• Orientación sobre la configuración del software, la optimización de voltaje y las estrategias de puertas para la clasificación de partículas submicrónicas.
• Preparación de líquidos y soluciones libres de ADN para evitar la contaminación del material genético.

Principales resultados:

• Un flujo de trabajo validado para la clasificación de muestras submicrónicas, incluidas las VLP y las bacterias, utilizando clasificadores de células BD FACSAria.
• Minimizar el ruido y mejorar los límites de detección de partículas pequeñas a través de fluidos optimizados y preparación de muestras.
• Reducción del riesgo de contaminación genómica, lo que permite una exitosa amplificación y secuenciación de todo el genoma de alto rendimiento.

Conclusiones:

• Este conjunto de protocolos proporciona un método sólido para la preparación de clasificadores de células BD FACSAria para el análisis de muestras submicrónicas.
• Los procedimientos detallados garantizan la integridad del material genético de pequeñas muestras, crucial para los estudios genómicos.
• El flujo de trabajo es adaptable a diversos entornos de laboratorio de recursos compartidos y compatible con otros clasificadores basados en cuvetas de BD Biosciences.