La codificación de fluorescencia secuencial programada por voltaje (VPSFE) permite la obtención de imágenes proteicas...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Biotecnología
• Biología celular

Sus antecedentes:

• Etiquetado inmunológico avanzado basado en código de barras de ADN para perfiles de proteínas unicelulares.
• Las imágenes multiplexadas convencionales sufren de ciclos lentos y laboriosos de extracción y hibridación de sondas, lo que limita el rendimiento y la universalidad.

Objetivo del estudio:

• Introducir un nuevo método de extracción de sonda in situ basado en electroforesis para imágenes multiplexadas específicas de alto rendimiento.
• Desarrollar la codificación de fluorescencia secuencial programada por voltaje (VPSFE) para la detección de proteínas.
• Establecer una estrategia de codificación de patrones de Turing basada en VPSFE para la identificación de objetivos multiplexados.

Principales métodos:

• Se utilizó electroforesis de baja tensión para la eliminación del exceso de sonda (2 min) y electroforesis de alta tensión para la disociación de la sonda híbrida (3 min).
• Robustez validada a través de 19 rondas de electroforesis cíclica y 10 rondas de imágenes repetitivas.
• Desarrolló VPSFE para la codificación secuencial de colores y una estrategia de patrones de Turing para la detección múltiple utilizando campos eléctricos.

Principales resultados:

• Logró imágenes de sonda iterativas de alta especificidad sin pasos de lavado.
• Se ha demostrado una especificidad y eficiencia excepcionales en 19 ciclos de electroforesis y 14 sondas.
• Se aplicó con éxito VPSFE a las proteínas relacionadas con la transición epitelial-mesenquimal (EMT).
• Generó 27 patrones de fluorescencia de Turing únicos para codificar 27 objetivos distintos utilizando tres condiciones de voltaje y tres canales de fluorescencia.

Conclusiones:

• El método basado en la electroforesis mejora significativamente la especificidad y la eficiencia en las imágenes multiplexadas in situ.
• VPSFE ofrece un enfoque rápido, universal y sin intercambio de sondas para el análisis de muestras biológicas complejas.
• La estrategia de codificación de patrones de Turing de campo eléctrico proporciona una nueva plataforma para la detección multiplexa de alta densidad.