Acumulación de mutaciones tras una exposición prolongada de las células HepaRG humanas a un carcinógeno genotóxico

Área de la Ciencia:

• Toxicología y farmacología
• Biología celular y genética

Sus antecedentes:

• La evaluación precisa del riesgo químico requiere modelos in vitro relevantes para el ser humano que imiten las exposiciones en el mundo real.
• Estudios previos mostraron una detección limitada de mutaciones citotóxicas en pruebas de genotoxicidad a corto plazo.

Objetivo del estudio:

• Investigar la acumulación de mutaciones en las células HepaRG 2D y 3D tras una exposición de 7 y 14 días a la N-nitrosodimetilamina (NDMA).
• Evaluar el impacto de la duración del tratamiento y el modelo de cultivo (2D frente a 3D) en la genotoxicidad inducida por NDMA.

Principales métodos:

• Las células HepaRG cultivadas en esferoides 2D y 3D fueron expuestas a concentraciones variables de NDMA durante 7 y 14 días.
• Un enfoque de puntos finales múltiples midió el daño del ADN, la formación de micronúcleos y las frecuencias de mutación.
• Para el análisis cuantitativo se utilizó el modelo de concentración de referencia (BMC).

Principales resultados:

• La exposición al NDMA condujo a aumentos dependientes de la concentración y la duración del daño en el ADN y las frecuencias de mutación.
• Las exposiciones de 14 días indujeron frecuencias de mutación más altas que las exposiciones de 7 días, con una citotoxicidad limitada (< 30%).
• Los esferoides HepaRG 3D exhibieron frecuencias de mutación significativamente más altas y valores de CMI más bajos en comparación con los cultivos 2D.
• La mutación primaria observada fue la transición T→C.

Conclusiones:

• Los períodos de exposición prolongados (14 días) aumentan la sensibilidad de las pruebas de genotoxicidad in vitro en las células HepaRG.
• Los esferoides 3D HepaRG proporcionan un modelo más sensible para detectar mutaciones inducidas por NDMA en comparación con los cultivos 2D.
• Los resultados apoyan el uso de períodos de exposición más largos y modelos 3D para una evaluación más precisa del riesgo químico.