Un sistema de reportero rápido y robusto basado en la luciferasa para evaluar la actividad de la proteasa del...

Área de la Ciencia:

• Virología
• La bioquímica
• Descubrimiento de drogas

Sus antecedentes:

• Los antivirales efectivos para el SARS-CoV-2 son cruciales, pero la evolución viral requiere nuevas estrategias terapéuticas.
• Dirigirse a las proteasas virales, como la proteasa principal (Mpro), es un enfoque clave para el desarrollo antiviral.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema de reporte sensible y rápido basado en la luminiscencia para evaluar la actividad Mpro del SARS-CoV-2.
• Validar la eficacia del sistema de notificación en la identificación de inhibidores de Mpro y la predicción de la actividad antiviral.

Principales métodos:

• Un nuevo sistema reportero, i-NSP4/5-Gluc2, fue diseñado utilizando Gaussia luciferasa (Gluc) fusionada con un fragmento de pro-interleucina 1β con un sitio de escisión Mpro.
• El sistema mide la luminiscencia secretada por Gluc durante la escisión mediada por M.
• El ensayo fue optimizado para la sensibilidad y la especificidad, validado con Nirmatrelvir, y utilizado para seleccionar una biblioteca de compuestos.

Principales resultados:

• El sistema i-NSP4/5-Gluc2 demostró una alta sensibilidad y especificidad en la detección de la actividad de Mpro.
• El ensayo identificó con éxito potenciales inhibidores de Mpro de una biblioteca de 46 compuestos.
• 13 de los 14 compuestos recién identificados mostraron una potente actividad antiviral contra el SARS-CoV-2 vivo.

Conclusiones:

• El sistema i-NSP4/5-Gluc2 es una herramienta validada de alto rendimiento para la detección rápida de inhibidores Mpro del SARS-CoV-2.
• Este ensayo acelera el descubrimiento de compuestos antivirales efectivos contra el SARS-CoV-2 y las posibles amenazas virales futuras.
• El poder predictivo del sistema facilita el desarrollo de nuevas terapias para pandemias virales.