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Updated: Jun 22, 2026
07:08
The Lambda Select cII Mutation Detection System
Published on: April 26, 2018
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Los ensayos SACF y GILA en células de LMA12 muestran un valor predictivo limitado para la genotoxicidad hepática en
Erica Coratella1, Rebecca Bohnert2, Benoit Fischer2
1Novartis Biomedical Research, Basel, Switzerland; Division of Molecular and Systems Toxicology, Department of Pharmaceutical Sciences, University of Basel, 4056 Basel, Switzerland.
Toxicology and applied pharmacology
|August 23, 2025
Resumen
Los ensayos de formación y crecimiento de colonias de agar suave en ratones mostraron un bajo valor predictivo para el desarrollo de carcinoma hepatocelular (HCC). Estos ensayos no pudieron detectar la oncogenia asociada con los virus adenoasociados recombinantes (rAAV) y los supresores tumorales.
Área de la Ciencia:
- Neoplasias hepáticas y biliares
- Oncología molecular
- Pruebas de genotoxicidad
Sus antecedentes:
- La integración de virus adenoasociados recombinantes (rAAV) en el locus de Rian se ha relacionado con el carcinoma hepatocelular (HCC) en ratones neonatales.
- La evaluación del riesgo oncogénico de rAAV en pacientes es difícil debido a la falta de modelos in vitro adecuados.
- Se proponen ensayos de crecimiento independientes del anclaje, como la formación de colonias de agar blando (SACF) y el crecimiento en bajo apego (GILA), para evaluar la tumorigenicidad.
Objetivo del estudio:
- Desarrollar y validar versiones murinas de los ensayos SACF y GILA para evaluar el riesgo de desarrollo de HCC.
- Evaluar el potencial oncogénico de la edición del genoma y la mutagénesis por inserción inducida por rAAV in vitro.
- Investigar el papel de los genes supresores de tumores específicos en el desarrollo de HCC utilizando la tecnología CRISPR/Cas9.
Principales métodos:
- Nocaut mediado por CRISPR/ Cas9 de los supresores tumorales seleccionados (Nf2, Tp53, Pten, Axin1, Ctnnb1, Tsc1) en la línea celular hepática murina de AML12.
- Generación de clones de células AML12 y MCF10A humanos estables con genomas rAAV integrados en los loci Rian y MEG8, respectivamente.
- Evaluación del crecimiento independiente del anclaje mediante ensayos SACF y GILA en ratones.
Principales resultados:
- El nocaut de Nf2 y la doble inactivación de Tp53 / Pten indujo la independencia de anclaje en las células AML12.
- La edición de Axin1, Ctnnb1 y Tsc1 no promovió el crecimiento independiente del anclaje.
- Los clones AML12 y MCF10A con genomas rAAV integrados no mostraron independencia de anclaje en los ensayos SACF y GILA.
Conclusiones:
- Los ensayos SACF y GILA en murinos demuestran un valor predictivo limitado para el desarrollo de HCC.
- Estos ensayos no pudieron detectar la oncogenia asociada con la integración del rAAV y la inactivación del gen supresor tumoral.
- Existe una necesidad crítica de desarrollar metodologías in vitro más precisas para evaluar la genotoxicidad del rAAV y el riesgo oncogénico.
