Tomografía de microscopía electrónica de transmisión por escaneo en virología: imágenes 3D de muestras congeladas y...

Área de la Ciencia:

• Biología estructural
• Técnicas de microscopía
• Virología

Sus antecedentes:

• La microscopía electrónica tridimensional (3D) es crucial para comprender los cambios celulares inducidos por el virus.
• Las técnicas convencionales como la tomografía por microscopía electrónica de transmisión (TEM) están limitadas por el grosor de la muestra (≤200 nm).
• Los métodos basados en microscopía electrónica de barrido (SEM) ofrecen volúmenes más grandes, pero a menudo con una resolución más baja o con limitaciones del eje Z.

Objetivo del estudio:

• Presentar un protocolo para la preparación de muestras virológicas para la tomografía por microscopía electrónica de transmisión por exploración (STEM).
• Para permitir la obtención de imágenes en 3D de alta resolución de la ultrastructura biológica de hasta 1 μm de espesor.
• Demostrar la utilidad de la tomografía STEM en virología estructural y microscopía correlativa.

Principales métodos:

• Congelación a alta presión, sustitución por congelación y incrustación de resina de muestras virológicas.
• Tomografía de microscopía electrónica de transmisión por escaneo (STEM) para el análisis ultrastructural en 3D.
• Microscopía correlativa de luz y electrones (CLEM) que integra imágenes de transferencia de energía de resonancia de Foerster (FRET) con tomografía STEM (FRET-3D-CLEM).

Principales resultados:

• Un protocolo robusto para preparar muestras de tomografía STEM a temperatura ambiente casi nativas.
• Visualización 3D detallada de la morfogénesis y el brote del virión del virus de la estomatitis vesicular recombinante (VSV).
• Información sobre la captación y el desmontaje de las nanofibrillas peptídicas que mejoran la infección utilizando FRET-3D-CLEM.

Conclusiones:

• La tomografía STEM es una técnica poderosa para el análisis estructural 3D de alta resolución de muestras biológicas, superando las limitaciones de otros métodos EM.
• El protocolo presentado facilita estudios avanzados en virología y nanotecnología.
• FRET-3D-CLEM combinado con la tomografía STEM proporciona una visión sin precedentes de los procesos celulares dinámicos.