Un ensayo de amplificación isotérmica con bucle rápido para la detección de la podredumbre de las raíces en la soja...

Área de la Ciencia:

• Patología vegetal
• Biología molecular
• Ciencias Agrícolas

Sus antecedentes:

• La producción de soja se enfrenta a pérdidas significativas de rendimiento debido a Phytophthora sojae, el patógeno que causa la podredumbre de la raíz y el tallo de Phytophthora.
• La detección precisa y rápida de P. sojae es crucial para las estrategias eficaces de control de la enfermedad.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un nuevo ensayo de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) para la detección sensible y específica del ADN de Phytophthora sojae.
• Comparar el rendimiento diagnóstico del ensayo LAMP desarrollado con los métodos PCR convencionales y anidados.

Principales métodos:

• Desarrollo de un ensayo de amplificación isotérmica mediado por bucle (LAMP) dirigido a la región de espaciador transcrito interno (ITS) del ADN de P. sojae.
• Análisis comparativo de la sensibilidad y especificidad de detección mediante PCR convencional, PCR anidada y el nuevo ensayo ITS-LAMP.
• Determinación del límite de detección del ensayo y evaluación de su resistencia a los inhibidores comunes encontrados en muestras de plantas.

Principales resultados:

• El ensayo ITS-LAMP logró la detección del 100% de P. sojae en las plántulas de soja infectadas, superando significativamente la PCR convencional (18,7%) y la PCR anidada (71,9%) con el mismo volumen de entrada de ADN.
• El ensayo LAMP demostró un límite de detección superior de 1 pg μL-1, dos órdenes de magnitud más bajo que un ensayo LAMP informado previamente.
• Las pruebas a ciegas confirmaron una especificidad del 100% contra una amplia gama de especies de oomycetes y hongos, con una alta precisión y resistencia a los inhibidores.

Conclusiones:

• El ensayo ITS-LAMP desarrollado es una herramienta altamente sensible, específica y precisa para la detección rápida de Phytophthora sojae.
• Este nuevo ensayo LAMP ofrece un valioso avance para el manejo de la podredumbre de raíces y tallos de Phytophthora en el cultivo de soja.
• La robustez y facilidad de uso del ensayo lo hacen adecuado para aplicaciones de campo y diagnósticos de rutina.