Biosensores de célula entera basados en TtgR diseñados para el monitoreo cuantitativo y selectivo de compuestos...

Área de la Ciencia:

• Microbiología
• Biología molecular
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• TtgR, un represor de transcripción de Pseudomonas putida, regula la expresión del gen de la resistencia a múltiples fármacos.
• La amplia especificidad del ligando de TtgR lo convierte en un candidato para el desarrollo de biosensores basados en factores de transcripción (TF).

Objetivo del estudio:

• Construir y caracterizar biosensores basados en TF en Escherichia coli utilizando TtgR y su promotor nativo (PttgABC).
• Diseñar variantes de TtgR con mayor selectividad y especificidad para la detección de flavonoides.
• Investigar las interacciones TtgR-flavonoides mediante métodos computacionales.

Principales métodos:

• Construcción de biosensores en E. coli mediante el acoplamiento de TtgR y PttgABC con el gen reportero de egfp.
• Ingeniería genética de la bolsa de unión TtgR para crear variantes con especificidades de ligando alteradas.
• Análisis estructural computacional y acoplamiento de ligandos para dilucidar los mecanismos de interacción.

Principales resultados:

• Desarrolló un biosensor que responde a diversos flavonoides mediante la combinación de TtgR, PttgABC y egfp.
• Las variantes de TtgR diseñadas mostraron perfiles de detección modificados, lo que permitió respuestas de biosensores a medida.
• Los biosensores que utilizan TtgR de tipo salvaje y el mutante N110F cuantificaron con precisión el resveratrol y la quercetina a 0,01 mM.

Conclusiones:

• El estudio presenta nuevos biosensores basados en TtgR para la detección de flavonoides con potencial para aplicaciones amplias.
• Las variantes de TtgR diseñadas ofrecen una plataforma para desarrollar biosensores con respuestas específicas de ligandos.
• Este trabajo proporciona una base para futuras aplicaciones en biología sintética e ingeniería metabólica.