Desarrollo de un nuevo método para generar cuerpos Q utilizando etiquetado HA mediado por tirosinasa

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Inmunología
• Química analítica

Sus antecedentes:

• Los cuerpos de amortiguación (cuerpos Q) son anticuerpos fluorescentes que utilizan la amortiguación/desamortiguación de la fluorescencia en la unión al antígeno.
• Los métodos de generación de cuerpos Q existentes tienen limitaciones en la versatilidad y el rango de color.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una nueva y versátil estrategia de generación de cuerpos Q.
• Para expandir la paleta de colores de los cuerpos Q a través de la conjugación de tintes específicos del sitio.
• Para crear un cuerpo Q dirigido al ligando de muerte celular programado 1 (PDL1).

Principales métodos:

• Se diseñó un fragmento variable de cadena única (scFv) contra PDL1 con una etiqueta de hemaglutinina (HA) N-terminal.
• Se expresa el scFv en Escherichia coli para un alto rendimiento y pureza.
• Se utilizó una conjugación específica del sitio mediada por la tirosinasa de colorantes funcionalizados con hidrazida en la etiqueta HA.

Principales resultados:

• Se generaron con éxito cuerpos Q con cuatro longitudes de onda de emisión diferentes.
• Todos los cuerpos Q generados mostraron un aumento de la fluorescencia dependiente de la concentración del antígeno.
• El cuerpo Q marcado con TAMRA logró una alta relación de señal a fondo y un límite de detección de 0,51 ± 0,01 μg/mL para PDL1.

Conclusiones:

• La generación de cuerpos Q mediada por etiquetas HA es un método robusto y versátil.
• Esta estrategia permite una amplia compatibilidad de tintes en la producción de cuerpos Q.
• Permite realizar pruebas inmunológicas fluorescentes sensibles y multiplexadas para diversos objetivos.