Envolucramiento del objetivo BPTF mediante sondas de fotoafinidad H2A.Z acetiladas

Área de la Ciencia:

• La epigenética
• Biología del cáncer
• Proteomía

Sus antecedentes:

• La variante de histona H2A.Z está implicada en la progresión del cáncer.
• La función de la proteína lectora epigenética BPTF a menudo está desregulada en los cánceres.
• Falta una validación directa de las interacciones entre el H2A.Z acetilado y el BPTF debido a las débiles afinidades de unión.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y utilizar sondas de fotoafinidad para capturar las interacciones transitorias entre las isoformas H2A.Z acetiladas y BPTF.
• Para validar la interacción directa entre la bromodomaína BPTF y el H2A.Z acetilado.
• Identificar los patrones naturales de acetilación de H2A.Z en las células humanas de cáncer de pulmón de células no pequeñas.

Principales métodos:

• Desarrollo de sondas de fotoafinidad de histona acetilada H2A.Z (isoformas I y II) con etiquetas N-terminal de diazirina y C-terminal de biotina.
• Experimentos de fotoenlace seguidos de SDS-PAGE para evaluar las interacciones BPTF-H2A.Z.
• Proteómica de abajo hacia arriba para cuantificar los patrones de acetilación H2A.Z en células de cáncer de pulmón de células no pequeñas A549.

Principales resultados:

• El bromodomaín BPTF recombinante interactúa directamente con las dos isoformas H2A.Z de una manera dependiente de la afinidad y específica de la unión al bolsillo de acetil-lisina.
• El BPTF endógeno fue fotoenlazado por sondas H2A.Z acetiladas en lisatos nucleares de células A549, aunque con menos eficiencia que H4K16ac.
• Proteomics identificó la mono- y diacetilación como patrones predominantes en H2A.Z, con sitios específicos de acetilación que incluyen K4ac, K7ac, K11ac y K15ac.

Conclusiones:

• Las sondas de fotoafinidad son efectivas para capturar las interacciones transitorias entre proteínas epigenéticas que involucran H2A.Z.
• El estudio valida una interacción directa entre el BPTF y el H2A.Z acetilado.
• Se necesita una optimización adicional para identificar reguladores epigenéticos adicionales de H2A.Z a través del análisis del interactoma.