Prueba de PCR digital dúplex en matrices de cámara microfluídica para la cuantificación del depósito total de ADN del...

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología molecular
• Inmunología

Sus antecedentes:

• Los reservorios latentes del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) persisten en las personas a pesar de la terapia antirretroviral a largo plazo (TARV).
• La cuantificación del ADN total del VIH es crucial para evaluar el tamaño del reservorio viral y controlar la eficacia del tratamiento.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un ensayo de PCR digital dúplex para la cuantificación precisa del ADN total del VIH.
• Evaluar el rendimiento del ensayo en la plataforma de PCR digital Absolute QTM utilizando muestras clínicas.

Principales métodos:

• Se diseñó un ensayo de PCR digital dúplex dirigido a los genes LTR y RPP30 humanos.
• El rendimiento del ensayo se evaluó en términos de linealidad, especificidad, sensibilidad y precisión.
• Se analizaron muestras clínicas de 50 personas con VIH tratadas con ART y 6 personas con VIH naïve.

Principales resultados:

• El ensayo demostró una buena linealidad (R2 = 0,977) y un límite inferior de detección de 79,7 copias de ADN del VIH/106 células.
• Se detectó un reservorio de VIH en todas las muestras de PWH, con diferencias significativas entre los grupos tratados con ART y los grupos no tratados con ART (p < 0,0001).
• Se encontró una fuerte correlación positiva (rho = 0,868) entre el tamaño del reservorio de VIH en las células T CD4+ y las PBMC.

Conclusiones:

• El ensayo de PCR digital dúplex desarrollado proporciona un método confiable para cuantificar el depósito total de ADN del VIH.
• Este ensayo amplía las plataformas de PCR digitales disponibles para la medición precisa del reservorio de VIH.
• Los hallazgos apoyan el uso de este ensayo en entornos clínicos para el manejo de la infección por VIH.