Desarrollo y aplicación de amplificación fluorescente y de flujo lateral con recombinación asistida para la detección...

Área de la Ciencia:

• Microbiología veterinaria
• Diagnóstico molecular
• Bacteriología

Sus antecedentes:

• Glaesserella parasuis (G. parasuis) causa una importante enfermedad respiratoria y mortalidad en lechones destetados.
• El control efectivo de la enfermedad de Glässer depende de la detección precisa y rápida de G. parasuis.
• Los métodos de detección actuales pueden carecer de la velocidad o la accesibilidad necesarias para una intervención oportuna.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y evaluar dos nuevas técnicas de diagnóstico basadas en la amplificación asistida por recombinasa (RAA, por sus siglas en inglés) para G. parasuis.
• Comparar la sensibilidad, especificidad y aplicabilidad práctica de los ensayos desarrollados.
• Proporcionar herramientas de diagnóstico rápidas y precisas para G. parasuis tanto en el laboratorio como en el campo.

Principales métodos:

• Desarrollo de dos ensayos RAA distintos: un RAA fluorescente (Fluo-RAA) y un RAA de flujo lateral (LFD-RAA).
• Utilizó muestras de hisopos nasales hervidas como plantillas de ADN, evitando la necesidad de una extensa extracción de ADN.
• Se ha evaluado la sensibilidad del ensayo, detectando hasta 10 copias (Fluo-RAA) y 100 copias (LFD-RAA) de ADN de G. parasuis.

Principales resultados:

• Los dos ensayos Fluo-RAA y LFD-RAA demostraron una alta especificidad para la detección de G. parasuis.
• Fluo-RAA logró una sensibilidad de 10 copias de ADN, mientras que LFD-RAA detectó 100 copias de ADN.
• Los ensayos con hisopos nasales hervidos mostraron una sensibilidad comparable a los kits de extracción de ADN comerciales.
• Fluo-RAA ofreció una mayor sensibilidad pero requirió más trabajo y condiciones de laboratorio.
• El LFD-RAA proporcionó resultados en una hora, sin requerir equipo especializado, lo que lo hace ideal para la aplicación en el campo.

Conclusiones:

• Desarrollo de ensayos RAA sensibles y específicos para la detección de G. parasuis.
• Fluo-RAA es una opción sensible para el diagnóstico de laboratorio.
• El LFD-RAA ofrece una solución rápida, libre de equipos y desplegable en el campo para la detección de G. parasuis.
• Estos ensayos pueden ayudar en el diagnóstico y control oportunos de la enfermedad de Glässer en poblaciones de cerdos.