Ingeniería impulsada por CRISPR/Cas9 de AcMNPV utilizando doble gRNA para la producción optimizada de proteínas...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• La genómica
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• El sistema CRISPR/Cas9 es una herramienta versátil de edición del genoma.
• Los sistemas de vectores de expresión de baculovirus (BEVS) son ampliamente utilizados para la producción de proteínas recombinantes.
• La optimización de los genomas de baculovirus puede mejorar el rendimiento de proteínas.

Objetivo del estudio:

• Informar sobre la primera aplicación de CRISPR/Cas9 de doble ARN guía único (sgRNA) para las deleciones del genoma del virus múltiple de nucleopoliedros de Autographa californica (AcMNPV).
• Evaluar el impacto de estas deleciones en la expresión de proteínas recombinantes para la bioproducción.
• Validar CRISPR/Cas9 como una herramienta para la ingeniería de genomas de baculovirus minimizados.

Principales métodos:

• Utilizó un enfoque dual de sgRNA CRISPR / Cas9 para las deleciones dirigidas del genoma en AcMNPV.
• Entrega simultánea de dos complejos distintos de ribonucleoproteína (RNP) en las células de insectos Sf9.
• Deleciones generadas de fragmentos de genes, incluidos los genes en tándem, dentro del genoma del baculovirus.
• Evaluación de la expresión de proteínas recombinantes (eGFP y HRPc) en células de insectos y larvas.

Principales resultados:

• Generación eficiente de deleciones del genoma de AcMNPV utilizando el sistema de doble guía CRISPR/Cas9.
• Las deleciones genéticas mostraron efectos variados en la expresión de proteínas recombinantes, con algunos rendimientos de mejora.
• En particular, la expresión de HRPc aumentó hasta 3,1 veces en las larvas de *Spodoptera frugiperda*.
• Demostró que la eliminación de genes no esenciales afecta el rendimiento de proteínas de manera diferente según el sistema huésped.

Conclusiones:

• La edición CRISPR/Cas9 de doble guía es un método rápido y preciso para la ingeniería del genoma del baculovirus.
• Esta estrategia permite el desarrollo de genomas de baculovirus minimizados para una mejor bioproducción.
• Los efectos dependientes del huésped de las deleciones de genes destacan la complejidad de optimizar BEVS.