Aislamiento y pruebas ex vivo de la división y activación de las células T CD8⁺ utilizando esplenocitos de ratón

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Biología del cáncer
• Inmunología celular

Sus antecedentes:

• La evaluación de la función de las células T CD8+ es crucial para comprender la inmunidad antitumoral.
• Los métodos existentes para el análisis de células T pueden ser complejos e introducir variabilidad.
• Se necesita un método simplificado y reproducible para estudiar las interacciones de las células T con las células cancerosas.

Objetivo del estudio:

• Describir un nuevo protocolo de cocultivo ex vivo para evaluar la activación, la proliferación y el potencial citotóxico de las células T CD8+.
• Investigar la modulación impulsada por el tumor de las funciones de las células T CD8+ utilizando células cancerosas o medios condicionados.
• Proporcionar una plataforma rentable y reproducible para el estudio de las interacciones entre células inmunes y tumores.

Principales métodos:

• Aislamiento y estimulación del volumen de esplenocitos de ratón con anticuerpos anti-CD3/anti-CD28.
• Co-incubación de esplenocitos activados con células cancerosas o en un medio acondicionado con células cancerosas (CM).
• Análisis citométrico de flujo de la proliferación de células T CD8+ (dilución CFSE), la activación (CD69), la función efectiva (Granzyme B, IFNγ) y la muerte de las células tumorales (Annexin-V/ 7-AAD).

Principales resultados:

• El protocolo permite con éxito la evaluación de la activación, la proliferación y las funciones efectoras de las células T CD8+.
• Se puede evaluar la modulación impulsada por el tumor de las respuestas de las células T, tanto dependientes como independientes del contacto.
• La muerte de las células cancerosas mediada por las células T activadas en co-cultivo es cuantificable.
• El método simplifica el flujo de trabajo mediante el uso de esplenocitos no fraccionados, eliminando la necesidad de IL-2 o clasificación celular.

Conclusiones:

• Este método de cocultivo ex vivo proporciona una plataforma robusta y simplificada para estudiar las respuestas de las células T CD8+ en el contexto del cáncer.
• El protocolo facilita la investigación de los mecanismos subyacentes a la supresión o aumento de las células T por parte de los tumores.
• Este enfoque apoya la investigación reproducible y rentable en la inmunología del cáncer y el desarrollo de la inmunoterapia.