Expresión y purificación procariótica del dominio hSox2-HMG

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Expresión y purificación de proteínas
• Regulación genética

Sus antecedentes:

• La familia de proteínas Sox (caja HMG relacionada con SRY), incluida hSox2, es vital para los procesos celulares, pero es difícil de estudiar debido a las limitaciones de producción.
• Los métodos existentes para la producción de proteínas Sox a menudo producen cantidades bajas, plegamiento incorrecto o purificación ineficiente, lo que dificulta los análisis funcionales y estructurales.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema de expresión procariótica eficiente, rentable y escalable para el dominio humano Sox2 HMG (hSox2-HMG).
• Obtener proteína hSox2-HMG de alta pureza y correctamente plegada adecuada para estudios estructurales y funcionales.

Principales métodos:

• Se ha construido un sistema de expresión procariótica utilizando el vector pET22b y la cepa huésped *Escherichia coli* BL21(DE3).
• Expresión de proteínas optimizada mediante inducción y purificación de IPTG mediante cromatografía de afinidad Ni-NTA, ultrafiltración y cromatografía de exclusión de tamaño.
• Condiciones de lisis y elución refinadas para maximizar el rendimiento y la pureza de las proteínas.

Principales resultados:

• Se logró con éxito la expresión de alto rendimiento de la proteína recombinante hSox2-HMG en *E. coli*.
• Se obtiene proteína hSox2-HMG de alta pureza con integridad estructural confirmada y plegamiento correcto.
• Estableció un flujo de trabajo de producción eficiente, escalable y rentable.

Conclusiones:

• El sistema de expresión procariótica desarrollado ofrece un método robusto para producir la proteína hSox2-HMG funcional.
• Este protocolo optimizado facilita más investigaciones estructurales y funcionales de las funciones de unión y regulación del ADN de hSox2-HMG.
• La proteína de alta pureza fácilmente disponible apoya los avances en la comprensión de las funciones biológicas de Sox2.