Elucidación de los impactos de los cultivos celulares en los niveles de hidroxilisina en los anticuerpos monoclonales...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Fabricación biofarmacéutica
• Química analítica

Sus antecedentes:

• La hidroxilisina (Hyl) es una modificación post-traduccional de la lisina.
• Los niveles elevados de Hyl pueden considerarse un atributo de calidad del producto que requiere investigación.
• La detección inicial de Hyl se realizó mediante análisis de masa intacta y mapeo de péptidos.

Objetivo del estudio:

• Investigar y controlar los niveles elevados de hidroxilisina (Hyl) durante la producción de anticuerpos monoclonales (mAb).
• Identificar las causas de raíz de los altos niveles de Hyl en el procesamiento aguas arriba.
• Desarrollar e implementar estrategias analíticas y de proceso sólidas para la mitigación de Hyl.

Principales métodos:

• Análisis de masa intacta y mapeo de péptidos para la detección inicial de Hyl.
• Revisión de los métodos analíticos desde el tríptico a la digestión IdeS para una cuantificación precisa de Hyl.
• Optimización del proceso en sentido ascendente que implica la composición de los medios (medio A frente a medio B) y la suplementación de Fe (III).

Principales resultados:

• Inicialmente se observaron niveles de hilo del 20% al 35% en el medio A, lo que requirió una investigación de la causa raíz.
• El mapeo tríptico de péptidos subestimó los niveles de Hyl en aproximadamente 10 veces.
• La digestión IdeS proporcionó una cuantificación precisa; el medio B redujo el Hyl al 10%-15%.
• El aumento de la concentración de Fe (III) en los medios redujo significativamente los niveles de Hyl.
• La suplementación de Fe ((III) demostró ser una estrategia de mitigación robusta, mantenida durante el aumento de escala del biorreactor de 500L.

Conclusiones:

• El aumento de la hidroxilisina es un PQA crítico en la producción de mAb que puede administrarse de manera efectiva.
• La digestión IdeS es un método analítico superior para la cuantificación precisa de Hyl en comparación con el mapeo tríptico.
• La suplementación de Fe (III) es una estrategia viable y escalable para controlar los niveles de Hyl en el bioprocesamiento aguas arriba.