Escala más pequeña, mismo impacto: replicación del perfil fenotípico de alto rendimiento en un laboratorio de...

Área de la Ciencia:

• Imágenes y análisis celulares
• Toxicología y evaluación de riesgos
• Cribado de alto contenido

Sus antecedentes:

• El Cell Painting permite la elaboración de perfiles fenotípicos de alto rendimiento (HTPP) para la evaluación de la toxicidad utilizando tintes fluorescentes y imágenes de alto contenido.
• Los protocolos HTPP actuales a menudo están optimizados para placas de 384 pozos, lo que limita la accesibilidad para laboratorios de menor rendimiento.
• Las agencias reguladoras utilizan HTPP para la detección de peligros químicos.

Objetivo del estudio:

• Adaptar los protocolos establecidos de pintura de células de 384 pozos a placas de 96 pozos.
• Evaluar la coherencia y la comparabilidad de los datos de toxicidad generados en el formato de 96 pozos.
• Evaluar la adaptabilidad de Cell Painting en diferentes formatos de laboratorio.

Principales métodos:

• Las células U-2 OS fueron cultivadas y tratadas con 12 compuestos de referencia en placas de 96 pozos.
• Se colorearon las células para cinco compartimentos celulares (Golgi, ER, ácidos nucleicos, citoesqueleto, mitocondrias) y se tomaron imágenes.
• Las características morfológicas fueron extraídas, normalizadas y analizadas utilizando el análisis del componente principal y la distancia de Mahalanobis para calcular las concentraciones de referencia (CMB).

Principales resultados:

• El protocolo de placa de 96 pozos adaptado demostró la consistencia intralaboratorial, con la mayoría de los BMC que difieren en menos de un orden de magnitud.
• Los valores de CMB obtenidos en el formato de 96 pozos fueron comparables a los CMB publicados para diez de los doce compuestos.
• Se observó una relación inversa entre la densidad de siembra celular y las distancias de Mahalanobis, lo que indica la influencia potencial de los factores experimentales.

Conclusiones:

• El Cell Painting puede adaptarse a formatos de placa de 96 pozos, lo que mejora su accesibilidad para las pruebas de toxicidad.
• El protocolo de pintura celular de 96 pozos proporciona resultados consistentes y comparables con los métodos establecidos.
• Esta adaptación apoya la validación del Cell Painting como una nueva metodología complementaria para las pruebas de toxicidad.