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Protocolo de irradiación ex vivo en las células de los ganglios linfáticos murinos

M N Yurova1, E I Fedoros2, A B Danilova2

  • 1N. N. Petrov National Medical Research Center of Oncology, Ministry of Health of Russian Federation, St. Petersburg, Russia. yumarni@gmail.com.

Bulletin of experimental biology and medicine
|August 28, 2025
PubMed
Resumen

Este estudio establece un protocolo para el análisis de ganglios linfáticos de ratón, revelando daños significativos en el ADN y niveles alterados de proteínas después de la exposición a rayos X. El método ayuda a evaluar la radiosensibilidad en las células linfoides.

Palabras clave:
Irradiación ex vivoLa apoptosisnódulo linfáticoen el campo de la oncologíala reparación

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Área de la Ciencia:

  • Biología de la radiación
  • Biología molecular
  • Inmunología

Sus antecedentes:

  • La evaluación del daño al ADN y la respuesta celular es crucial para comprender los efectos de la radiación.
  • El desarrollo de protocolos eficientes para el análisis del tejido linfoide es esencial para los estudios de radiosensibilidad.

Objetivo del estudio:

  • Validar un método para aislar las células de los ganglios linfáticos de ratón para estudios de irradiación ex vivo.
  • Caracterizar el daño del ADN y la expresión de proteínas clave involucradas en la reparación, la detención del ciclo celular y la apoptosis posterior a la irradiación.

Principales métodos:

  • Las suspensiones de células de los ganglios linfáticos de ratón fueron sometidas a irradiación ex vivo con rayos X (2 Gy).
  • El daño del ADN fue cuantificado usando el ensayo del cometa.
  • Se analizaron los niveles de las proteínas de reparación del ADN (γH2AX, Rad51, XPA), la detención del ciclo celular (Cdc25A, p21, p16) y la apoptosis (Bax, Bcl-2).

Principales resultados:

  • La irradiación aumentó significativamente el daño del ADN (7 veces) y los niveles de proteínas de reparación (γH2AX, Rad51, XPA) y proteínas de detención del ciclo celular (Cdc25A, p21, p16).
  • La proteína pro-apoptótica Bax aumentó significativamente, mientras que los niveles de Bcl-2 se mantuvieron sin cambios.
  • El protocolo permite la preparación rápida de muestras para la evaluación de la radiosensibilidad.

Conclusiones:

  • El protocolo desarrollado aísla eficazmente el tejido linfoide para el análisis de la radiosensibilidad.
  • La irradiación ex vivo induce un daño mensurable del ADN y modula las vías críticas de respuesta celular en las células linfoides del ratón.
  • Este método es valioso para estudiar la radiosensibilidad en diversas cepas de ratones y condiciones experimentales.