SUMO2 no hidrolisado por ADP-ribosilado a través del cobre (I) Cícloadición de azido alquino catalizado

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología Química
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• La ADP-ribosilación es una modificación post-traduccional catalizada por las ADPr-transferasas utilizando β-NAD+.
• El enlace α-glucósido formado es lábil y susceptible a la degradación celular, lo que dificulta el estudio.
• Estabilizar este enlace es crucial para investigar la localización, las interacciones y la identificación de proteínas ribosiladas por ADP.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método para estabilizar el enlace ADP-ribosa en las proteínas.
• Para crear un análogo no hidrolizable de las proteínas ADP-ribosiladas para estudios bioquímicos.
• Facilitar el estudio de la dinámica y las interacciones de la ribosilación ADP dentro de los sistemas celulares.

Principales métodos:

• Síntesis de un enlace de triazol estable que imita el enlace ADP-ribosa a través de la cicloadición azida-alquina catalizada por cobre (CuAAC).
• Utilizado 1′′-α-azido-ADPribose y N-terminalmente biotinilado SUMO21-92 con una sustitución de propargilo glicina en His17.
• Se utiliza la química de clic para vincular covalentemente el análogo modificado de ADP-ribosa a una proteína.

Principales resultados:

• Se sintetizó con éxito un enlace de triazol estable y no hidrolizable en el sitio de la ADP-ribosa.
• Se demostró la viabilidad del uso de CuAAC para crear análogos estabilizados de proteínas ADP-ribosiladas.
• Se ha establecido un método para generar proteínas biotiniladas y estabilizadas ADP-ribosiladas para ensayos de extracción.

Conclusiones:

• El método desarrollado proporciona una herramienta estable para el estudio de la ribosilación ADP.
• Este enfoque permite una investigación robusta de la localización e interacciones de las proteínas ribosiladas por ADP.
• El análogo estabilizado es valioso para identificar a los socios que interactúan y comprender las funciones biológicas de la ribosilación de ADP.