Una estrategia proteómica basada en la espectrometría de masas para detectar péptidos acilados de cadena larga

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Proteomía
• Biología celular

Sus antecedentes:

• La acylación S de cadena larga es una modificación de proteínas vital que implica la adición de ácidos grasos a los residuos de cisteína.
• Esta modificación lipídica es crítica para la asociación de la membrana proteica y las vías de señalización celular.
• Los desafíos analíticos surgen de la hidrofobidad y los enlaces tioéster labiles de los péptidos S-acilados.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y optimizar un flujo de trabajo de espectrometría de masas para la detección de péptidos S-acilados de cadena larga.
• Investigar la estabilidad de los enlaces tioéster en diversas condiciones de preparación de muestras proteómicas.
• Para permitir el análisis directo de la acilación S de cadena larga de proteínas sin derivatización química.

Principales métodos:

• Cromatografía líquida optimizada para una mejor separación de péptidos S-acilados.
• Se ha investigado la estabilidad del enlace tioester bajo diferentes condiciones de pH, agente reductor y digestión.
• Se han evaluado los métodos de fragmentación CID, HCD y ETD para el análisis de la EM/EM de péptidos S-acilados.

Principales resultados:

• Los péptidos S-acilados de cadena larga mostraron resistencia general a las variaciones de pH y a los agentes reductores.
• Los tiempos de digestión prolongados de la tripsina condujeron a la pérdida de la señal de algunos péptidos S-acilados.
• La fragmentación de disociación de colisión de alta energía (HCD) proporcionó la mayor cantidad de información de secuencia para los péptidos S-acilados.

Conclusiones:

• El flujo de trabajo optimizado facilita la identificación y el análisis directos de la acilación S de cadena larga.
• En las células HEK293T se detectaron estados de acilación dual de GNA13 y co-ocurrencia de S-acilación y prenilación en RhoB.
• Esta estrategia apoya el estudio de las modificaciones de los lípidos hidrofóbicos y sus funciones reguladoras en la función y señalización de las proteínas.