Combinando el análisis mutativo profundo y los enfoques de vinculación SPR para la identificación de epítopos a gran escala de anticuerpos anti-ricina

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Inmunología
• Toxicología

Sus antecedentes:

• La ricina, una lectina tóxica de los granos de ricino, representa una amenaza de bioterrorismo.
• La inmunoterapia pasiva con anticuerpos es una posible contramedida, pero el desarrollo efectivo es un desafío.
• La neutralización depende de la especificidad del epítopo, no sólo de la alta afinidad.

Objetivo del estudio:

• Caracterización de un grupo de 17 anticuerpos contra la ricina (mAbs de VHH e IgG).
• Determinar las afinidades de anticuerpos, la selectividad y las especificidades epitópicas para la neutralización de la ricina.
• Identificar epítopos críticos para la neutralización potente y la reactividad cruzada.

Principales métodos:

• Resonancia plasmónica de superficie (SPR) y interferometría de biocapas (BLI) para el análisis de afinidad y selectividad.
• Enlace de epítopos basado en SPR con análisis de red.
• Escaneo mutativo profundo con visualización de la superficie de la levadura para la identificación de residuos epitópicos.

Principales resultados:

• Se caracterizaron 17 anticuerpos contra la ricina, evaluando afinidades para las isoformas D y E de la ricina y la aglutinina de la ricina.
• SPR y BLI diferenciaron efectivamente las afinidades de unión y la cinética.
• El mapeo de epítopos identificó residuos críticos y epítopos conservados en las isoformas de ricina, correlacionados con la potencia de neutralización.

Conclusiones:

• La afinidad del anticuerpo y la especificidad del epítopo son cruciales para la neutralización efectiva de la ricina.
• Los resultados consistentes del SPR y el escaneo mutativo profundo validaron la identificación del epítopo.
• Los hallazgos proporcionan información para el diseño racional de terapias con ricina basadas en anticuerpos.