TIGER: Un ratón reportero de edición del genoma en vivo para investigar enfoques de entrega de edición de precisión

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• La genética
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• La edición del genoma in vivo es prometedora para el tratamiento de trastornos genéticos y ambientales.
• Un desafío importante es la entrega segura y eficiente de herramientas de edición a los tejidos objetivo.
• Se necesita un sistema de informe versátil para evaluar las tecnologías de entrega.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un modelo de ratón reportero agnóstico para la evaluación de la edición del genoma in vivo.
• Permitir una evaluación rápida, precisa y cuantificable de las tecnologías de edición de bases de adenina (ABE) y edición de bases primas (PE).

Principales métodos:

• Desarrollo del ratón reporter de edición del genoma tdTomato in vivo (TIGER), con tdTomato mutado en el locus Polr2a.
• Utilizando ABE y PE para restaurar la fluorescencia del tomate, lo que indica una edición exitosa.
• El uso de vectores virales y no virales para la administración a los tejidos oculares (RPE, fotorreceptores, glia de Müller, malla trabecular) y a los tejidos extraoculares (hepatócitos, músculo, neuronas).
• Evaluación de la eficiencia de la edición mediante microscopía confocal de dos fotones in vivo y ex vivo y análisis de fluorescencia.

Principales resultados:

• El modelo de ratón TIGER demostró con éxito la evaluación de la edición específica del tipo de tejido y célula.
• La eficacia de la EBA y la EP se logró in vivo en múltiples tipos de células oculares utilizando varios vectores de administración.
• La EP mediada por el virus adeno-asociado (VAA) tuvo éxito en los tejidos extraoculares, incluyendo el hígado, el músculo y las neuronas cerebrales, mediante inyección intravenosa.
• El sistema de informe cuantificó con precisión la eficiencia de edición y la entrega en diversos tejidos.

Conclusiones:

• El ratón TIGER es una herramienta valiosa para desarrollar y optimizar plataformas de entrega de edición del genoma in vivo.
• Este sistema de informe facilita el avance de ABE y PE para amplias aplicaciones terapéuticas.
• El modelo TIGER acelera la traducción de las tecnologías de edición del genoma hacia el uso clínico.