Un bioconjugado de De Novo Luciferasa para la detección de la gripe A basado en Cas13

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Diagnóstico molecular
• Tecnología de biosensores

Sus antecedentes:

• Los biosensores CRISPR-Cas13 ofrecen una detección rápida del ARN viral, pero se enfrentan a limitaciones en matrices de muestras complejas debido a los métodos de lectura actuales.
• Los diagnósticos existentes a menudo se basan en ensayos de fluorescencia o flujo lateral, lo que dificulta su aplicación en diversas muestras biológicas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una nueva plataforma de diagnóstico basada en Cas13 que utilice la luminiscencia para mejorar las capacidades de detección.
• Para crear un conjugado de proteína y ácido nucleico, SOLUNAR, para la detección sensible y específica de ARN viral en muestras complejas.

Principales métodos:

• Desarrolló un Reporter de Ácido Nucleico Luminoso Selectivo (SOLUNAR), un dispositivo de diagnóstico Cas13 que incorpora un conjugado de proteína y ácido nucleico.
• Proteínas de novo diseñadas con manijas químicas selectivas y afinidades de unión ajustables para un control preciso de la actividad del sensor.
• Utilizó la escisión del ARN por la actividad colateral de Cas13 para restaurar la unión a las proteínas y desencadenar una señal luminiscente a través de la reconstitución de la luciferasa dividida.

Principales resultados:

• SOLUNAR logró la detección selectiva de la influenza A H1N1 a temperatura ambiente en una reacción de un solo recipiente.
• Se ha demostrado un límite de detección sin amplificación (LOD) de 1,5 nM.
• Compatibilidad confirmada con muestras que contengan hasta un 10% de suero, lo que indica robustez en medios complejos.

Conclusiones:

• La luminiscencia es una lectura viable para el diagnóstico basado en Cas13, que ofrece ventajas en la detección de muestras complejas.
• La plataforma SOLUNAR muestra un potencial significativo para la detección enzimática basada en la actividad y amplias aplicaciones en el diagnóstico de enfermedades infecciosas.