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Labeling DNA Probes03:31

Labeling DNA Probes

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DNA probes are fragments of DNA labeled with a reporter tag to enable their detection or purification. The resulting labeled DNA probes can then hybridize to target nucleic acid sequences through complementary base-pairing, and may be used to recover or identify these regions.
Radioisotopes, fluorophores, or small molecule binding partners like biotin or digoxigenin, are the most widely used reporter tags for labeling DNA probes. These labels can be attached to the probe DNA molecule via...
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Immunogold Electron Microscopy01:20

Immunogold Electron Microscopy

4.3K
Immunoelectron microscopy utilizes immunogold labeling of endogenous proteins with specific antibodies to detect and localize these proteins in cells and tissues. The procedure provides insights into the distribution and quantification of protein under different stimulation conditions offering clues about their functions. Conjugating highly electron-dense gold particles with primary or secondary antibodies allow antigen detection on and within cells, with high resolution and specificity.
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Etiquetado endógeno guiado por nanobody de ALFA

Zhe Wang1,2, Fang Hu1,3, Fudong Xue1

  • 1Key Laboratory of Biomacromolecules, CAS Center for Excellence in Biomacromolecules, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, Beijing, China.

Nature chemical biology
|August 29, 2025
PubMed
Resumen

Este estudio presenta ANGEL, un nuevo método que utiliza nanobodies fluorescentes para detectar con éxito los knockins de etiquetas ALFA en las células. Esta técnica permite un cribado eficiente y de alto rendimiento para aplicaciones de ingeniería genética.

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Área de la Ciencia:

  • Biología celular
  • Biología molecular
  • Biotecnología

Sus antecedentes:

  • Las etiquetas peptídicas pequeñas son útiles para etiquetar proteínas endógenas debido a la mínima interferencia.
  • La falta de fluorescencia inherente en las etiquetas peptídicas complica la detección de las líneas celulares modificadas.
  • Se necesitan métodos de cribado de alto rendimiento para las aplicaciones de ingeniería genética.

Objetivo del estudio:

  • Desarrollar un método para iluminar selectivamente las células con knockins de etiqueta ALFA exitosos.
  • Para racionalizar el cribado de células de alto rendimiento utilizando la clasificación de células activadas por fluorescencia.
  • Permitir aplicaciones versátiles para el etiquetado endógeno de proteínas en entornos celulares nativos.

Principales métodos:

  • Desarrollo de nanobodies fluorescentes estabilizadores de antígenos fusionados con proteínas (Nbs) dirigidos al péptido ALFA.
  • La ingeniería de los nanobodies ALFA (NbALFA) para la degradación selectiva en ausencia del péptido ALFA.
  • Utilización de la clasificación celular activada por fluorescencia para el cribado de alto rendimiento de los eventos knockin.

Principales resultados:

  • Desarrollo exitoso de nanobodies etiquetados con fluorescencia (NbALFA) que se degradan selectivamente sin el péptido ALFA.
  • Se ha demostrado un aumento sustancial de la intensidad de fluorescencia tras la inserción exitosa del péptido ALFA en el genoma.
  • Estableció la técnica de etiquetado endógeno guiado por ALFA Nb (ANGEL) para aplicaciones celulares.

Conclusiones:

  • ANGEL proporciona un enfoque adaptable para la iluminación selectiva de células, lo que facilita la detección eficiente de las modificaciones genéticas.
  • La técnica admite diversas aplicaciones, incluido el etiquetado preciso de proteínas, la amplificación de señales, el monitoreo dinámico y el análisis de interactomas.
  • ANGEL mejora la utilidad de las etiquetas de péptidos pequeños para los estudios de proteínas endógenas dentro de su contexto celular nativo.