Cuantificación de CP4 EPSPS en hojas de Nicotiana tabacum modificadas genéticamente por LC-MS/MS con etiquetado O

Área de la Ciencia:

• Biotecnología agrícola
• Biología molecular de las plantas
• Química analítica

Sus antecedentes:

• El gen CP4 EPSPS es crucial para desarrollar cultivos globalmente significativos tolerantes a los herbicidas.
• La cuantificación precisa de la expresión de CP4 EPSPS es esencial para fines reglamentarios y de investigación en plantas modificadas genéticamente.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un método de espectrometría de masas en tándem de cromatografía líquida sensible (LC-MS/MS) para cuantificar la proteína CP4 EPSPS.
• Establecer un método analítico fiable para medir los niveles de expresión de CP4 EPSPS en hojas de *Nicotiana tabacum* (tabaco).

Principales métodos:

• Desarrolló un método sensible LC-MS/MS dirigido a péptidos únicos de la proteína CP4 EPSPS.
• Se utilizaron péptidos CP4 EPSPS sintetizados etiquetados con 18O como estándares internos para una cuantificación precisa.
• Valida el método para la especificidad, la linealidad, la precisión y la exactitud en extractos vegetales brutos.

Principales resultados:

• El método LC-MS/MS demostró una excelente especificidad y linealidad.
• Se obtuvo una precisión y exactitud satisfactorias en todos los análisis de muestras.
• El método resultó ser sensible y selectivo para cuantificar el CP4 EPSPS en extractos de hojas de tabaco crudo.

Conclusiones:

• Se desarrolló y validó con éxito un método LC-MS/MS novedoso, sensible y selectivo para la cuantificación de CP4 EPSPS.
• Este método elimina la necesidad de laboriosas etapas de pre-separación o purificación, simplificando el análisis.
• El ensayo validado proporciona una herramienta sólida para evaluar la expresión de CP4 EPSPS en aplicaciones de biotecnología agrícola.